表面微生物監測

一、目的

目的是確定各種重要表面存在的活體微生物，包括層流工作臺，實(shí)驗設備（集菌儀），實(shí)驗室人員。

二、方法：接觸碟法、擦拭法

1、接觸碟法：是將充滿(mǎn)規定的瓊脂培養基的接觸碟對規則表面或平面進(jìn)行取樣，然后至合適的溫度下培養一定時(shí)間并計數。

適用范圍：實(shí)驗人員及實(shí)驗臺面等

接觸碟：直徑55cm

取樣面積：約為25cm²

結果報告：CFU/碟

培養基：種類(lèi)、培養條件、培養基質(zhì)量同沉降菌監測

自制接觸碟

與之接觸碟（商品化）

三層嚴密包裝，內層真空封裝

高壓滅菌+鈷60輻射滅菌，確保產(chǎn)品無(wú)菌

培養基應具有極強的彈性、持水性，不會(huì )出現滲水現象。

2-8攝氏度保存，一般保質(zhì)期半年

可根據客戶(hù)需求在培養基中添加青霉素酶等催化酶，用于去除生產(chǎn)中產(chǎn)生的抗生素粉塵的抗菌性。

監測步驟：

1）從冷藏柜中取出接觸皿，并恢復至室溫。

2）將包裝整體送入取樣地點(diǎn)，在此過(guò)程中逐步去掉外面兩層包裝，最后一層真空包裝在操作間打開(kāi)。

3）打開(kāi)接觸皿上蓋，使培養基充分接觸待測表面，必要使用手指輕輕按壓接觸皿外側底部中心約10秒，輕輕抬起，將上蓋從接觸皿一側小心蓋上。

4）在接觸皿磨砂區域標記取樣地點(diǎn)、取樣時(shí)間和取樣人。

5）取樣后的清理：用消毒劑或殺孢子劑擦拭測試區域，以消除培養基的殘留。

6）將接觸皿從潔凈室取出，按規定的溫度和時(shí)間倒置培養。

7）觀(guān)察、計數

注意：

1）表面微生物檢測要在實(shí)驗結束后進(jìn)行。

2）消毒劑殘留物對監測的影響

測試表面接觸時(shí)，接觸皿往往會(huì )接觸清洗或消毒潔凈室的消毒劑殘留物。數百種不同的殺菌劑用于世界各地的制藥設施，事實(shí)上許多監管機構希望看到輪流使用不同消毒原理的兩種消毒劑，這些不同的消毒物質(zhì)會(huì )抑制接觸板上污染物的生長(cháng)。

為抵制這些消毒劑的生長(cháng)抑制性質(zhì)，中和劑被添加到培養基中。卵磷脂，聚山梨醇酯80，組氨酸和硫代硫酸鈉的適當組合被認定能中和高達80%的常用消毒劑。

3）方法驗證的問(wèn)題

環(huán)境中分離的代表菌；代表性試驗表明；回收率

4）取樣部位

頭部、口罩、肩部、前胸、前臂、手腕、腿部/靴子、眼罩

5）限度的理解：A級＜1cfu/碟

舉例：監測了4個(gè)部位（人員）（左上臂接近手腕處，右上臂接近手腕處、前胸、口罩外表面）

不合格結果：4個(gè)接觸碟平均菌落數≥1cfu

2、擦拭法：采用合適尺寸的無(wú)菌模板或標尺確定擦拭的面積，無(wú)菌拭子取樣后，拭子置合適的緩沖液或培養基中，充分振蕩，再用適應的方法計數。是接觸碟法的補充。

浸濕液：通常為無(wú)菌生理鹽水或0.1%的蛋白胨溶液約5毫升

培養基：TSA

計數法：平皿涂布法、平皿澆注法、薄膜過(guò)濾貼膜法

拭子頭：材料類(lèi)型包括聚酯、聚氨酯、尼龍和棉

棉簽頭：需要靈活、耐足夠長(cháng)的時(shí)間，達到難以達到的地點(diǎn)，如管道內部。

操作：

1、浸濕拭子：開(kāi)啟裝有約為5ml的無(wú)菌浸濕液的小試管（到帶有螺旋帽的），將拭子頭部浸濕，緊貼管內壁轉動(dòng)，擠壓出多余的溶液。

2、擦拭表面：拿住拭子柄與待測物表面成30度角，緩慢并全部涂抹待測物表面三次，沒(méi)涂抹一次注意翻轉拭子頭的方向。

3、涂抹后折斷拭子頭放入浸濕液試管中蓋上帽，充分振蕩帶拭子的試管10秒，取出1ml混懸液接種到滅菌平皿中。

4、澆注滅菌TSA培養基 ，培養，計數。

注意：

1）表面微生物檢測要在試驗結束后進(jìn)行

2）消毒劑殘留物對監測的影響

3）取樣位置

4）取樣方式

5）方法驗證問(wèn)題

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