沉降菌監測

1、方法

《醫藥工業(yè)潔凈室（區）沉降菌的測試方法》（GB/T16294-2010）

沉降法：通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿中，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下使其繁殖到可見(jiàn)菌落并進(jìn)行計數，以平板培養皿中的菌落數來(lái)判定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此評定潔凈室（區）的潔凈度。

2、沉降皿

沉降皿：直徑90mm*15mm

培養基：大豆酪蛋白瓊脂（TSA）

        沙氏瓊脂（SDA）

培養條件：同浮游菌監測

培養基質(zhì)量：

  應符合2015年版《中國藥典》中“（1921）藥品微生物實(shí)驗室質(zhì)量管理指導原則”的相關(guān)要求。

1）培養基制備要求

2）培養基貯藏要求

3）培養基的質(zhì)量控制試驗

  用于環(huán)境監控的培養基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養基，那么在使用前應進(jìn)行100%的預培養以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中及避免出現假陽(yáng)性結果。

關(guān)鍵問(wèn)題：暴露蒸發(fā)失水，會(huì )降低培養基的某些微生物的生長(cháng)。

  單向氣流暴露4小時(shí)，TSA版失重16%

  為了延長(cháng)暴露和培養基的時(shí)間，同時(shí)確保平皿仍然提供可靠的結果，沉降皿可以澆注到一個(gè)特定的高澆注線(xiàn)。

包裝：通常是雙重或三重包裝，這取決于潔凈室的級別。最外層包裝進(jìn)入下一個(gè)最高級別的潔凈室中之后被移除。對于A級（ISO5級）潔凈室和隔離器，三層透明包裝時(shí)最合適的。

隔離器的沉降皿：最內層的包裝材料必須是過(guò)氧化氫蒸汽不可滲透的，以確保這種常用的消毒劑不會(huì )轉移的培養基上，采樣后抑制微生物生長(cháng)，最好使用為隔離器設計的培養基。

3、監測

1）人員的清潔、消毒和著(zhù)裝

2）在溫度、濕度、壓力的測試之后進(jìn)行

3）明確測試狀態(tài)，靜態(tài)測試人員不得多于2人，一般應動(dòng)態(tài)監測

4）開(kāi)啟凈化空調系統

單向流、靜態(tài)10min以上，非單向流30min以上

5）最少采樣點(diǎn)數

注：A級（單向流）面積指送風(fēng)口表面積；任何小的潔凈區采樣點(diǎn)不得少于2個(gè)。

6）采樣位置：

離地面0.8-1.5m左右，高于工作面

關(guān)鍵設備或關(guān)鍵區域，可增加采樣點(diǎn)

7）采樣次數：每個(gè)點(diǎn)1次

8）采樣時(shí)間：靜態(tài)30分鐘；動(dòng)態(tài)4小時(shí)

   單碟暴露時(shí)間可以少于4小時(shí)，同一位置可使用對個(gè)沉降碟連續進(jìn)行監測并累積計數。

9）最少培養皿數：

4、注意事項

1）采取一切措施防止采樣污染和其他人為對樣本的污染。

2）采樣注意事項：同懸浮粒子監測

3）培養基質(zhì)量

4）陰性對照試驗  每次或每個(gè)區域取1個(gè)對照培養皿

5）日常監測：A級區及無(wú)菌隔離系統采樣點(diǎn)數目應不小于3個(gè)且每個(gè)采樣點(diǎn)的平皿數應不小于1個(gè)。

5、結果判斷：

每個(gè)測點(diǎn)的沉降菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。

在靜態(tài)測試時(shí)，若某測點(diǎn)的沉降游菌的平均濃度超過(guò)評定標準，應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。

6、限度的理解：A級＜1cfu/碟

   舉例：監測了左中右3個(gè)位置，1碟/位置

不合格結果：3個(gè)沉降碟平均菌落數≥1cfu

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