微生物檢驗新理念

1、風(fēng)險管理、風(fēng)險調查/評估

*實(shí)驗環(huán)境、器材、方法的要求大幅度提高

*各種SOP越來(lái)越細化

藥品微生物的風(fēng)險管理

中檢院無(wú)菌室萬(wàn)級區域浮游菌分布圖

近六年無(wú)菌室萬(wàn)級浮游菌高限圖

潔凈室使用次數與浮游菌數關(guān)系

環(huán)境微生物歸屬

2、檢驗理念的轉變

*檢驗方法個(gè)性化

*微生物鑒定由形態(tài)、生化鑒定向分子生物學(xué)鑒定發(fā)展

①實(shí)驗者由嚴格按照標準檢驗，向按統一原則，選擇適宜的方法轉變

②2015版中國藥典致病菌鑒定策略的轉變

*利用規定的選擇培養基初篩；

*自己選擇確證方法

*建議采用分子遺傳學(xué)方法，以最新版的《伯杰氏細菌學(xué)鑒定手冊》為金標準（微生物限度檢查法應用指導原則）。

2010版中國藥典沙門(mén)菌（Salmonella）的鑒別

1.取培養物1ml，接種于10ml四硫磺酸鈉亮綠培養基中，培養18-24小時(shí)后，分別劃線(xiàn)接種與膽鹽硫乳瓊脂（或沙門(mén)、志賀菌屬瓊脂）培養基和麥康凱瓊脂（或曙紅亞甲藍瓊脂）培養基平板上，培養18-24小時(shí)，（必要時(shí)延長(cháng)至40-48小時(shí)）。若平板上無(wú)菌落生長(cháng)，或生長(cháng)的菌落不同于表6所列的特征，判供試品未檢出沙門(mén)菌。

表6 沙門(mén)菌菌落形態(tài)特征

2.若平板上生長(cháng)的菌落與表6所列的菌落形態(tài)特征相符或疑似，用接種針選2-3個(gè)菌落分別用于三糖鐵瓊脂培養基高層斜面上進(jìn)行斜面和高層穿刺接種，培養18-24小時(shí)，如斜面未見(jiàn)紅色，底層未見(jiàn)黃色；或斜面黃色、底層無(wú)黑色，判供試品未檢出沙門(mén)菌。

3.否則，應取三糖鐵瓊脂培養基斜面上的培養物進(jìn)行適宜的生化試驗和血清凝集試驗，確認是否為沙門(mén)菌。

注意：利用多種選擇培養基（特定的營(yíng)養條件和生態(tài)學(xué)環(huán)境），通過(guò)菌落形態(tài)、代謝物顯色反應等，采用排除法鑒別。

選擇和分離培養 取預培養物0.1ml接種至10mlRVS增菌肉湯中，30-35℃培養18-24小時(shí)，取少量RVS沙門(mén)菌增菌肉湯培養物劃線(xiàn)接種于木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂平板上，30-35℃培養18-48小時(shí)。

沙門(mén)菌在木糖賴(lài)氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂平板上生長(cháng)良好，菌落為紅色，中心有或無(wú)黑色。用接種針挑選疑似菌落于三糖鐵瓊脂培養基高層斜面上進(jìn)行謝苗和高層穿刺接種，培養18-24小時(shí)，或采用其他適宜的方法進(jìn)一步鑒定。

結果判斷 若木糖賴(lài)氨酸脫氧膽鹽瓊脂平板上有疑似菌落生長(cháng)，且三糖鐵瓊脂培養基的斜面為紅色、底層為黃色，或斜面黃色、底層黑色，應進(jìn)一步進(jìn)行適宜的鑒定試驗，確證是否為沙門(mén)菌。如果平板上沒(méi)有菌落生長(cháng)，或雖有菌落生長(cháng)，但鑒定結果為陽(yáng)性，或三糖鐵瓊脂培養基的斜面未見(jiàn)紅色、底層未見(jiàn)黃色；或斜面黃色、底層無(wú)黑色，判供試品未檢出沙門(mén)菌。

上一篇：雙歧桿菌檢驗（征求意見(jiàn)稿）

下一篇：微生物檢驗實(shí)驗環(huán)境的控制