實(shí)驗室環(huán)境和人體表面微生物的檢查

一、目的要求
1. 證明實(shí)驗室環(huán)境與體表存在微生物。
2．比較來(lái)自不同場(chǎng)所與不同條件下細菌的數量和類(lèi)型。
3．觀(guān)察不同類(lèi)群微生物的菌落形態(tài)特征。
4．體會(huì )無(wú)菌操作的重要性。
二、基本原理
平板培養基含有細菌生長(cháng)所需要的營(yíng)養成分，當取自不同來(lái)源的樣品接種于培養基上，在適宜溫度下培養1～2d內每一菌體即能通過(guò)很多次細胞分裂而進(jìn)行繁殖，形成一個(gè)可見(jiàn)的細胞群體集落，稱(chēng)為菌落。每一種細菌所形成的菌落都有它自己的特點(diǎn)，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通過(guò)平板培養來(lái)檢查環(huán)境中細菌的數量和類(lèi)型。
三、器材
l．培養基   肉膏蛋白胨瓊脂平板。
2．儀器或其他用具   無(wú)菌水，滅菌棉簽(裝在試管內)，接種環(huán)，試管架，酒精燈或煤氣燈，記號筆，廢物缸。
四、操作步驟
每組在“實(shí)驗室”和“人體”兩大部分中各選擇一個(gè)內容做實(shí)驗，或由教師指定分配，最后結果供全班討論。
l．寫(xiě)標簽
任何一個(gè)實(shí)驗，在動(dòng)手操作前均需首先將器皿用記號筆做上記號，寫(xiě)上班級、姓名、日期，本次實(shí)驗還要寫(xiě)上樣品來(lái)源(如實(shí)驗室空氣或無(wú)菌室空氣或頭發(fā)等)，字盡量小些，寫(xiě)在皿底的一邊，不要寫(xiě)在當中，以免影響觀(guān)察結果。
培養皿的記號一般寫(xiě)在皿底上。如果寫(xiě)在皿蓋上，同時(shí)觀(guān)察兩個(gè)以上培養皿的結果，打開(kāi)皿蓋時(shí)，容易混淆。
2．實(shí)驗室細菌檢查
(1)空氣   將一個(gè)肉膏蛋白胨瓊脂平板放在當時(shí)做實(shí)驗的實(shí)驗室，移去皿蓋，使瓊脂培養基表面暴露在空氣中；將另一肉膏蛋白胨瓊脂平板放在無(wú)菌室或無(wú)人走動(dòng)的其他實(shí)驗室，移去皿蓋。lh后蓋上兩個(gè)皿蓋。
(2)實(shí)驗臺和門(mén)的旋鈕
①用記號筆在皿底外面中央畫(huà)一直線(xiàn)，再在此線(xiàn)中間處畫(huà)一垂直線(xiàn)，如圖27-l。
②取棉簽   左手拿裝有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無(wú)名指夾持棉塞(或試管帽)，將其取出(圖27-2，B)，將管口很快地通過(guò)煤氣燈(或酒精燈)的火焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出(圖27-2，C)。塞回棉塞(或試管帽)(27-2，D)，并將空試管放在試管梁上。
③弄濕棉簽    左手取滅菌水試管，如上法撥出棉塞(或試管帽)并燒灼管口，將棉簽插入水中，再提出水面，在管壁上擠壓一下以除去過(guò)多的水分，小心將棉簽取出，燒灼管口，塞回棉塞(或試管帽)，并將滅菌水試管放在試管梁上。
④取樣   將濕棉簽在實(shí)驗臺面或門(mén)旋鈕上擦拭約2cm2的范圍．
⑤接種   在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開(kāi)啟成一縫．再將棉簽伸人，在瓊脂表面頂端接種，即滾動(dòng)一下，立即閉合皿蓋。并按圖27-2E和F，將原放棉簽的空試管撥出棉塞(或試管帽)，燒灼管口，插入用過(guò)的棉簽，將試管放回試管架。
⑥劃線(xiàn)   另取接種環(huán)在火焰上滅菌，按圖3—3方法進(jìn)行劃線(xiàn)，整個(gè)劃線(xiàn)操作均要求無(wú)菌操作，即靠近火焰，而且動(dòng)作要快。
3．人體細菌的檢查
（1）手指(洗手前與洗手后)
①分別在兩個(gè)瓊脂平板上標明洗手前與洗手后(班級、姓名．日期)。
②移去皿蓋，將未洗過(guò)的手指在瓊脂平板的表面，輕輕地來(lái)回劃線(xiàn)，蓋上皿蓋。
③用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中沖洗干凈，干燥后，在另一瓊脂平板表面來(lái)回移動(dòng)，蓋上皿蓋。
(2)頭發(fā)    在揭開(kāi)皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發(fā)用力搖動(dòng)數次，使細菌降落到玻脂平板表面，然后蓋上皿蓋。
A. 接種時(shí)，用左手將平皿開(kāi)啟一縫；B.棉簽伸入平板接種;
C.用己滅菌并冷卻了的接種環(huán)劃線(xiàn); D. 第二部分劃線(xiàn); E.最后部分劃線(xiàn)
 (3)咳嗽   將去皿蓋的瓊脂平板放在離口約6～8cm處，對著(zhù)瓊脂表面用力咳嗽，然后蓋上皿蓋。
(4)鼻腔  
①按照實(shí)驗臺檢查法的步驟②和③，取出棉簽，并將其弄濕。
②用濕棉簽在鼻腔內滾動(dòng)數次。
③按實(shí)驗臺檢查法的步驟⑤和⑥，接種與劃線(xiàn)，然后蓋上皿蓋。
4．將所有的瓊脂平板翻轉，使皿底朝上，放37℃培養箱，培養1～2d。
五．結果記錄方法
(1)菌落計數   在劃線(xiàn)的平板上，如果菌落很多而重疊，則數平板最后1/4面積內的菌落數。不是劃線(xiàn)的平板，也一分為四，數l/4面積的菌落數。
(2)根據菌落大小、形狀、高度、干濕等特征觀(guān)察不同的菌落類(lèi)型。但要注意，如果細菌數量太多，會(huì )使很多菌落生長(cháng)在一起，或者限制了菌落生長(cháng)而變得很小，因而外觀(guān)不典型，故觀(guān)察菌落的特點(diǎn)時(shí)，要選擇分離得很開(kāi)的單個(gè)菌落。
菌落特征描寫(xiě)方法如下：
①大小   大、中、小、針尖狀�？上葘⒄麄�(gè)平板上的菌落粗略觀(guān)察一下，再決定大、中、小的標準，或由教師指出一個(gè)大小范圍。
②顏色   黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。
③干濕情況   干燥、濕潤、粘稠。
④形態(tài)   圓形、不規則等。
⑤高度   扁平、隆起、凹下。
⑥透明程度   透明、半透明、不透明。
⑦邊緣   整齊、不整齊。
五、實(shí)驗報告
1．結果
(1)將你自已的平板結果記錄于下表中。
（2）與其他同學(xué)所做的結果進(jìn)行比較
2．思考題
(1)比較各種來(lái)源的樣品，哪一種樣品的平板菌落數與菌落類(lèi)型最多？
(2)人多的實(shí)驗室與無(wú)菌室(或無(wú)人走動(dòng)的實(shí)驗室)相比，平板上的菌落數與菌落類(lèi)型有什么區別？你能解釋一下造成這種區別的原因嗎？
(3)洗手前后的手指平板，菌落數有無(wú)區別？
(4)通過(guò)本次實(shí)驗，在防止培養物的污染與防止細菌的擴散方面，你學(xué)到些什么？有什么體會(huì )。
   
   

 

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