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下列各類(lèi)培養基常用于測定細菌的糖類(lèi)代謝試驗、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗、碳源和氮源利用試驗等生化反應。
1.糖、醇發(fā)酵培養基
（1）成分
基礎液
蛋白胨 10g
氯化鈉 5g
0.5%酸性品紅指示液 10ml
（或0.4%溴麝香草酚藍指示液） （6ml）
水 1000ml
糖、醇類(lèi) 每100ml基礎液內各加0.5g
（2）制法 取蛋白胨和氯化鈉加入水中，微溫使溶解，調pH值使滅菌后為7.3±0.1,加入指示液混勻。每100ml分別加入1種糖、醇或糖苷，混勻后分裝于小管中（若需觀(guān)察產(chǎn)氣反應，在小管內另放置杜漢小倒管）。于116℃滅菌15分鐘。
常用的糖、醇或糖苷：阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、半乳糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖、蕈糖、纖維二糖、蜜二糖、棉子糖、松三糖、菊糖、糊精、淀粉、甘露醇、衛矛醇、山梨醇、肌醇、甘油、水楊素、七葉苷等。
（3）用途 鑒別各種細菌對糖類(lèi)的發(fā)酵生化反應，發(fā)酵者產(chǎn)酸，培養基變色（加酸性品紅者由無(wú)色至紅色或再至黃色；加溴麝香草酚藍者由藍色至黃色）；產(chǎn)氣時(shí)，小倒管內有小氣泡。
2.七葉苷培養基
（1）成分
蛋白胨 5g 七葉苷 3g
磷酸氫二鉀 1g 水 1000ml
枸櫞酸鐵 0.5g
（2）制法 除七葉苷外，取上述成分混合，微溫使溶解，加入七葉苷混勻，調pH值使滅菌后為7.3±0.1,分裝于試管中，121℃滅菌15分鐘。
（3）用途 用于鑒別細菌對七葉苷的水解試驗，產(chǎn)生棕黑色沉淀為陽(yáng)性反應。
3.磷酸鹽葡萄糖胨水培養基
（1）成分
蛋白胨 7g 葡萄糖 5g
磷酸氫二鉀 3.8g 水 1000ml
（2）制法 取上述成分混合，微溫使溶解，調pH值使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管中，121℃滅菌15分鐘。
（3）用途 用于鑒別細菌的甲基紅試驗（M-R反應）和乙酰甲基甲醇試驗（V-P反應）。
①甲基紅試驗（M-R反應） 取可疑菌落或斜面培養物，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養基中，置35℃培養2~5天，于培養管內加入甲基紅指示液（稱(chēng)取甲基紅0.1g，加95%乙醇300ml,使溶解后，加水至500ml）數滴，立即觀(guān)察，呈鮮紅色或橘紅色為陽(yáng)性，呈黃色為陰性。
②乙酰甲基甲醇生成試驗（V-P反應） 取可疑菌落或斜面培養物，接種于磷酸鹽葡萄糖胨水培養基中，置35℃培養48小時(shí)，量取2ml培養液，加入萘酚乙醇試液（稱(chēng)取α-萘酚5g，加無(wú)水乙醇溶解使成100ml）1ml，混勻，再加40%氫氧化鉀溶液0.4ml，充分振搖，立刻或數分鐘內出現紅色，即為陽(yáng)性反應；無(wú)紅色反應為陰性，如為陰性反應，置35℃水浴4小時(shí)后再觀(guān)察。
4.蛋白胨水培養基
（1）成分
蛋白胨 10g 水 1000ml
氯化鈉 5g
（2）制法 取上述成分混合，微溫使溶解，調pH值使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管，121℃滅菌15分鐘。
（3）用途 用于鑒別細菌能否分解色氨酸而產(chǎn)生靛基質(zhì)的生化反應。
①靛基質(zhì)試驗 取可疑菌落或斜面培養物，接種于蛋白胨水培養基中，置35℃培養24~48小時(shí)，必要時(shí)培養4~5天，沿管壁加入靛基質(zhì)試液數滴，液面呈玫瑰紅色為陽(yáng)性，呈試劑本色為陰性。
②靛基質(zhì)試液 稱(chēng)取對二甲氨基苯甲醛5g，加入戊醇（或異戊醇）75ml，充分振搖，使完全溶解后，再取鹽酸25ml徐徐滴人，邊加邊振搖，以免驟熱導致溶液色澤變深�；蚍Q(chēng)取對二甲氨基苯甲醛1g，加入95%乙醇95ml，充分振搖，使完全溶解后，再取鹽酸20ml徐徐滴入。
5.三糖鐵瓊脂培養基
（1）成分
蛋白胨 20g 硫酸亞鐵 0.2g
牛肉浸出粉 5g 硫代硫酸鈉 0.2g
乳糖 10g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
蔗糖 10g 瓊脂 12~15g
葡萄糖 1g 水 1000ml
氯化鈉 5g
（2）制法 除乳糖、蔗糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，加熱使溶解，調pH值使滅菌后為7.3±0,1，加入瓊脂，加熱溶脹后，再加入其余成分，搖勻，分裝，121℃滅菌15分鐘，制成高底層（2~3cm）短斜面。
（3）用途 用于初步鑒別腸桿菌科細菌對糖類(lèi)的發(fā)酵反應和產(chǎn)生硫化氫試驗。
方法和結果觀(guān)察：取可疑菌落或斜面培養物，做高層穿剌和斜面劃線(xiàn)接種，置35℃培養24~48小時(shí)，觀(guān)察結果。培養基底層變黃色為葡萄糖發(fā)酵陽(yáng)性，斜面層變黃色為乳糖、蔗糖發(fā)酵陽(yáng)性；底層或整個(gè)培養基呈黑色表示產(chǎn)生硫化氫。
6.克氏雙糖鐵瓊脂培養基
（1）成分
蛋白胨 20g 枸櫞酸鐵 0.3g
牛肉浸粉 3g 硫代硫酸鈉 0.3g
酵母浸粉 3g 0.2%酚磺酞指示液 12.5ml
乳糖 10g 瓊脂 12~15g
葡萄糖 1g 水 1000ml
氯化鈉 5g
（2）制法 除乳糖、葡萄糖、指示液、瓊脂外，取上述成分，混合，加熱使溶解，調pH值使滅菌后為7.3±0.1,加入瓊脂，加熱溶脹后，再加入其余成分，搖勻，分裝，121℃滅菌15分鐘，制成髙底層（2~3cm）短斜面。
（3）用途 用于初步鑒別腸桿菌科細菌對糖類(lèi)的發(fā)酵反應和產(chǎn)生硫化氫試驗。
方法和結果觀(guān)察：取可疑菌落或斜面培養物，做髙層穿刺和斜面劃線(xiàn)接種，置35℃培養24~48小時(shí)，觀(guān)察結果。培養基底層變黃色為葡萄糖發(fā)酵陽(yáng)性，斜面層呈黃色為乳糖發(fā)酵陽(yáng)性，斜面層呈紅色為乳糖發(fā)酵陰性；底層或整個(gè)培養基呈黑色表示產(chǎn)生硫化氫。
7.脲（尿素）培養基
（1）成分
蛋白胨 1g 0.2%酚紅溶液 6ml
葡萄糖 1g 20%無(wú)菌脲溶液 100ml
氯化鈉 5g 水 1000ml
磷酸氫二鉀 2g
（2）制法 除脲溶液外，取上述成分，混合，調pH值使滅菌后為6.9±0.1，混勻后，121℃滅菌15分鐘，冷至50~55℃，加入無(wú)菌脲溶液（經(jīng)膜除菌過(guò)濾），混勻，分裝于滅菌試管中。
（3）用途 用于鑒別細菌的尿素酶反應。
方法和結果觀(guān)察：取可疑菌落或少量斜面培養物接種于培養基內，置35℃培養24小時(shí)，觀(guān)察結果。培養基變?yōu)榧t色為尿素酶反應陽(yáng)性；不變色為陰性，陰性者需延長(cháng)觀(guān)察至1周。
8.苯丙氨酸瓊脂培養基
（1）成分
磷酸氫二鈉 1g 氯化鈉 5g
酵母浸膏 3g 瓊脂 12~15g
DL-苯丙氨酸（DL-phenylalanine） 2g 水 1000ml
（或L-苯丙氨酸） （1g）
（2）制法 除瓊脂外，取各成分溶于水，調pH值使滅菌后為7.3±0.1，再加入瓊脂，加熱溶脹，分裝試管，121℃滅菌15分鐘，制成長(cháng)斜面。
（3）用途 用于鑒別細菌的苯丙氨酸脫氨酶試驗（也稱(chēng)苯丙酮酸試驗）。
方法和結果觀(guān)察：取斜面培養物，大量接種于苯丙氨酸瓊脂斜面，置35℃培養4小時(shí)或18~24小時(shí)，取4~5滴10%三氯化鐵溶液試劑，由斜面上部流下，若出現墨綠色，即為苯丙氨酸脫氨酶試驗陽(yáng)性；倘若不變色則為陰性。
9.氨基酸脫羧酶試驗培養基
（1）成分
①基礎液
蛋白胨 5g 1.6%溴甲酚紫指示液 1ml
酵母浸出粉 3g 水 1000ml
葡萄糖 1g
②氨基酸
L-賴(lài)氨酸 0.5g（需加堿溶液溶解）
L-鳥(niǎo)氨酸 0.5g（需加堿溶液溶解）
L-精氨酸 0.5g（不需加堿溶液溶解）
（2）制法 先配制基礎液備用；將溶解后的3種氨基酸，各分別加至100ml基礎液（使氨基酸的終濃度為0.5%），混勻，調pH值使滅菌后為6.8。分裝于小試管中，每管2.5ml并滴加1層液體石蠟；同時(shí)分裝一部分基礎液于小試管，作為對照培養基，均置116℃滅菌10分鐘。
（3）用途 用于鑒別細菌的脫羧酶、雙水解酶試驗。
方法和結果觀(guān)察：取疑似菌斜面培養物分別接種于上述3種培養基及基礎液對照培養基，置35℃培養24~48小時(shí)。在培養初期由于待檢細菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，試驗培養基和對照培養基應呈黃色，繼續培養時(shí)，試驗培養基如呈紫色或紫紅色，即為陽(yáng)性反應；如至培養末期，培養基仍同對照管呈黃色，則判為陰性反應。
10.明膠培養基
（1）成分
蛋白胨 5g 明膠 120g
牛肉浸出粉 3g 水 1000ml
（2）制法 取上述成分加入水中，浸泡約20分鐘，加熱溶解，調pH值使滅菌后為7.3±0.1，分裝于小試管中，121℃滅菌15分鐘。
（3）用途 用于細菌的明膠液化試驗。
方法和結果觀(guān)察：取少量待檢菌斜面培養物穿刺接種于明膠培養基內，置35℃培養24小時(shí)，取出置冰箱內10~20分鐘。如培養基仍呈溶液狀，則為陽(yáng)性；培養基重新凝固，則為陰性。細菌液化明膠之作用有時(shí)甚為緩慢，如未見(jiàn)液化，需繼續培養1~2周方可確定陰性。
11.丙二酸鈉培養基
（1）成分
酵母浸出粉 1g 磷酸二氫鉀 0.4g
氯化鈉 2g 丙二酸鈉 3g
葡萄糖 0.25g 0.4%溴麝香草酚藍指示液 6ml
硫酸銨 2g 水 1000ml
磷酸氫二鉀 0.6g
（2）制法 除指示液外，將上述成分溶解，調pH值使滅菌后為6.8，再加入指示液。分裝小管中，121℃滅菌15分鐘。
（3）用途 用于鑒別細菌能否利用丙二酸鈉作為碳源而生長(cháng)繁殖。
方法和結果觀(guān)察：取斜面或肉湯培養物接種于丙二酸鈉培養基內，置35℃培養48小時(shí)。于24小時(shí)和48小時(shí)后各觀(guān)察1次結果。培養基顏色由綠色變成藍色為陽(yáng)性反應；無(wú)顏色變化，或由綠色變成黃色，則為陰性反應。
12.枸櫞酸鹽培養基
（1）成分
氯化鈉 5g 枸櫞酸鈉（無(wú)水） 2g
硫酸鎂 0.2g 1.0%溴麝香草酚藍指示液 10ml
磷酸氫二鉀 1g 瓊脂 14g
磷酸二氫銨 1g 水 1000ml
（2）制法 除指示液和瓊脂外，取上述成分，混合，微溫使溶解，調pH值使滅菌后為6.9±0.1，加入瓊脂，加熱溶脹，然后加入指示液，混勻，分裝于小試管中，121℃滅菌15分鐘，制成斜面。
（3）用途 用于鑒別細菌能否利用枸櫞酸鹽作為碳源和氮源而生長(cháng)繁殖。
方法和結果觀(guān)察：取可疑菌落或斜面培養物，接種于枸櫞酸鹽培養基的斜面上，一般培養48~72小時(shí)，凡能在培養基斜面生長(cháng)出菌落，培養基即由綠色變成藍色者為陽(yáng)性反應；無(wú)菌落生長(cháng)，培養基仍綠色者為陰性反應，陰性反應者應繼續培養觀(guān)察至7天。
13.硝酸鹽胨水培養基
（1）成分
蛋白胨 10g 硝酸鉀 2g
酵母浸出粉 3g 水 1000ml
（2）制法 取上述成分，加熱溶解，調pH值使滅菌后為7.3±0,1,分裝于小試管中，121℃滅菌15分鐘。
（3）用途 用于鑒別細菌能否還原硝酸鹽成亞硝酸鹽。方法和結果觀(guān)察：取待檢菌培養物接種于硝酸鹽胨水培養基中，置35℃培養24小時(shí)。將下列甲液和乙液于用前等量混合，每個(gè)培養物加混合物0.1ml，產(chǎn)生紅色為陽(yáng)性反應，不產(chǎn)生紅色為陰性反應。
甲液：稱(chēng)取α-萘胺5g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。
乙液：稱(chēng)取磺胺酸（對氨基苯磺酸）8g，溶解于5mol/L醋酸1000ml中。
14.石蕊牛奶培養基
（1）成分
脫脂奶粉 10g 水 100ml
10%石蕊溶液 0.65ml
（2）制法 取上述成分混勻后，分裝于小試管中，116℃滅菌10分鐘。
（3）用途 用于檢查細菌對牛奶的凝固和發(fā)酵作用。
15.半固體營(yíng)養瓊脂培養基
（1）成分
蛋白胨 10g 瓊脂 4g
牛肉浸出粉 3g 水 1000ml
氯化鈉 5g
（2）制法 除瓊脂外，取上述成分，混合，微溫使溶解，調pH值使滅菌后為7.2±0.2,再加入瓊脂，加熱溶脹，分裝于小管中，121℃滅菌15分鐘后，直立放置。待凝固后備用。
（3）用途 用于觀(guān)察細菌的動(dòng)力，也可用于一般菌種的保存。
細菌動(dòng)力檢查：取疑似菌斜面培養物穿刺接種于半固體營(yíng)養瓊脂培養基中，置35℃培養24小時(shí)，細菌沿穿刺外周擴散生長(cháng)，為動(dòng)力陽(yáng)性；否則為陰性。陰性者，應再繼續培養觀(guān)察2~3天。
