阻濕態(tài)微生物穿透試驗方法

1 菌片制備

   金黃色葡萄球菌ATCC 29213在胰酶大豆瓊脂上36℃±1℃下培養18-24h，將2-3個(gè)菌落接種至3ml胰酶大豆肉湯中，在36℃±1℃下培養18-24h。用蛋白胨水1:10稀釋至濃度為1×104CFU/mL~4×104CFU/mL，對最終菌懸液進(jìn)行計數。

   打開(kāi)無(wú)菌袋取出仍貼附在智商的聚氨酯膜，將載菌材料片的可浸濕聚氨酯膜面朝上放在潔凈度盤(pán)子上，為了便于操作，用雙面膠帶將載菌材料片的四角固定于盤(pán)子上。用培養皿蓋作為模板在載菌膜上化出一個(gè)相應的區域，在該區域涂布1.0ml金黃色葡萄球菌懸浮液，然后將菌片至于56℃干燥大約30min，在干燥期間采用消毒的玻璃涂布器在載菌膜上繼續涂布菌懸液，以使菌液均勻分布。

   菌片制備好后當日使用。

2 狀態(tài)調節

   如需要，按照GB6529對試件進(jìn)行狀態(tài)調節，也可在標準正常室溫條件下進(jìn)行狀態(tài)天界和試驗。狀態(tài)調節的方法應記錄在試驗報告中。

3 試驗設定

   調節控制桿上配重，使試驗指施加到瓊脂上的力值為3N±0.02N。

   將第一個(gè)瓊脂培養皿放在轉盤(pán)上。

4 材料應用

   用下列計數：采用一個(gè)由內、外環(huán)組成的圓形砝碼，總重800g±1g對材料施加標準的繃緊力。將圓柱放在內環(huán)中央，再將試件覆蓋在圓柱體和內環(huán)上，將除去貼附紙后的菌片染菌面向下放在試件上。最后在聚氨酯膜上覆蓋一層HDPE膜，向下推緊外環(huán)，使三層材料牢固的加在兩個(gè)環(huán)之間。

5 試驗

   將上述環(huán)組件輕輕搭放在第一個(gè)去下蓋子的瓊脂培養皿上，鋼環(huán)自由懸放于旋轉盤(pán)的外面，將試驗指置于皿口內測的HDPE膜上，這樣試件可與瓊脂表面接觸。試驗指按上述規定施加3N壓力，是儀器運行15min。

15min后立即取下環(huán)套件放在一邊。

從旋轉盤(pán)上取下第一個(gè)培養皿并放上皿蓋。馬上將第二個(gè)培養皿和環(huán)套件放在旋轉盤(pán)上。

對后面的四個(gè)培養皿用同一個(gè)環(huán)套組件執行上述步驟。

五個(gè)培養皿完成試驗后，取下菌片并棄去，將試件反轉，上面朝下用HDPE膜覆蓋。

在第六個(gè)培養皿上操作15min,即完成第一個(gè)平行試驗組。

其余4片試件同樣按上述方法各運行六個(gè)培養皿各15min，每片試件使用一片新鮮制備的菌片。

如果瓊脂表面聚有液體，將其置于潔凈臺上干燥，將各瓊脂培養皿加蓋置于36℃±1℃培養48h。

計數每只培養皿中金黃色葡萄球菌菌落數，培養皿中心15min半徑區域內的菌落數不計。

如果右一個(gè)皿或多個(gè)皿的計數大于750CFU（不包括上述的培養皿中心15min半徑區域內的菌落數），可重新驚醒試驗。如果重新試驗仍有一個(gè)或多個(gè)皿計數大于750CFU，表明該材料不可能具有足夠的屏障特性，可終止試驗。

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