水中細菌總數的測定

一、目的要求
l．學(xué)習水樣的采取方法和水樣細菌總數測定的方法。
2．了解水源水的平板菌落計數的原則。
二、基本原理
本實(shí)驗應用平板菌落計數技術(shù)測定水中細菌總數。由于水中細菌種類(lèi)繁多，它們對營(yíng)養和其他生長(cháng)條件的要求差別很大，不可能找到一種培養基在一種條件下，使水中所有的細菌均能生長(cháng)繁殖，因此，以一定的培養基平板上生長(cháng)出來(lái)的菌落，計算出來(lái)的水中細菌總數僅是一種近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨瓊脂培養基。
三、器材
l．培養基   肉膏蛋白胨瓊脂培養基，無(wú)菌水。
2.儀器或其他用具   滅菌三角燒瓶，滅菌的帶玻璃塞瓶，滅菌培養皿，滅菌吸管，滅菌試管等。
四、操作步驟
l．水樣的采取
(1)自來(lái)水   先將自來(lái)水龍頭用火焰燒灼3min滅菌，再開(kāi)放水龍頭使水流5min后，以滅菌三角燒瓶接取水樣，以待分析。
(2)池水、河水或湖水   應取距水面l0～15cm的深層水樣，先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉過(guò)來(lái)，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛滿(mǎn)后，將瓶塞蓋好，再從水中取出，最好立即檢查，否則需放入冰箱中保存。
2．細菌總數測定
(1)自來(lái)水
①用滅菌吸管吸取lml水樣，注入滅菌培養皿中。共做兩個(gè)平皿。
②分別傾注約15mL己溶化并冷卻到45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養基，并立即在桌上作平面旋搖，使水樣與培養基充分混勻。
③另取一空的滅菌培養皿，傾注肉膏蛋白胨瓊脂培養基15mL作空自對照。
④培養基凝固后，倒置于37℃ 溫箱中，培養24h，進(jìn)行菌落計數。
⑤兩個(gè)平板的平均菌落數即為lml水樣的細菌總數。
(2)池水、河水或湖水等
①稀釋水樣   取3個(gè)滅菌空試管，分別加入9ml滅菌水。取lml水樣注入第一管9ml滅菌水內、搖勻，再自第一管取1ml至下一管滅菌水內，如此稀釋到第三管，稀釋度分別為10-1、10-2與10-3。稀釋倍數看水樣污濁程度而定，以培養后平板的菌落數在30～300個(gè)之間的稀釋度最為合適，若三個(gè)稀釋度的菌數均多到無(wú)法計數或少到無(wú)法計數，則需繼續稀釋或減小稀釋倍數。
一般中等污穢水樣，取10-1、10-2、10-3三個(gè)連續稀釋度，污穢嚴重的取10-2、10-3 、10-4三個(gè)連續稀釋度。
②自最后三個(gè)稀釋度的試管中各取lmL稀釋水加入空的滅菌培養皿中，每一稀釋度做兩個(gè)培養皿。
③各傾注15ml已溶化并冷卻至45℃左右的肉膏蛋白胨瓊脂培養基，立即放在桌上搖勻。
④凝固后倒置于37℃培養箱中培養24h。
3．菌落計數方法
(1)先計算相同稀釋度的平均菌落數。若其中一個(gè)平板有較大片狀菌苔生長(cháng)時(shí)，則不應采用，而應以無(wú)片狀菌苔生長(cháng)的平板作為該稀釋度的平均菌落數。若片狀菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均勻時(shí)，則可將此一半的菌落數乘2以代表全平板的菌落數，然后再計算該稀釋度的平均菌落數。
(2)首先選擇平均菌落數在30~300之間的，當只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數符合此范圍時(shí)，則以該平均菌落數乘其稀釋倍數即為該水樣的細菌總數(見(jiàn)表26-1，例1)。
(3)若有兩個(gè)稀釋度的平均菌落數均在30～300之間，則按兩者菌落總數之比值來(lái)決定。若其比值小于2，應采取兩者的平均數；若大于2，則取其中較小的菌落總數(見(jiàn)表26-l，例2及例3)。
(4)若所有稀釋度的平均菌落數均大于300，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數(見(jiàn)表26-l，例4)。
(5)若所有稀釋度的平均菌落數均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數(見(jiàn)表26-l，例5)。
(6)若所有稀釋度的平均菌落數均不在30～300之間，則以最近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數(見(jiàn)表26-1，例6)。
五、實(shí)驗報告
1．結果
（1）自來(lái)水
（2）池水、河水或湖水等
2．思考題
（1）從自來(lái)水的細菌總數結果來(lái)看，是否合乎飲用水的標準？
（2）你所測的水源水的污穢程度如何？
（3）國家對自來(lái)水的細菌總數有一標準，那么各地能否自行設計其測定條件（諸如培養溫度，培養時(shí)間等）來(lái)測定水樣總數呢？為什么？
   
   

 

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