摘要：制藥工業(yè)潔凈室內存在許多抑制微生物生長(cháng)因素，消除這些影響微生物生長(cháng)的因素，是正確評估潔凈室微生物污染的關(guān)鍵；環(huán)境監測培養基的選擇不當也不能正確評估潔凈室微生物的污染。
關(guān)鍵詞：假陰性；假陽(yáng)性；環(huán)境影響因素；預制培養基平板
Abstract: The clean rom of the pharmaceutical industry exists to inhibitmicrobial growth factors, the elimination of these factors affect microbialgrowth is the key to correctly assess the microbial contamination of the cleanroom; improper selection of the environmental monitoring medium can notcorrectly assess the microbial contamination of the clean room.
Keywords: False negative；False positive；EnvironmentalFactors i；Ready to- use Culture Media Plate
目前國內各制藥企業(yè)環(huán)境監測中微生物的監測方法大多依據GB/T 16293-2010醫藥工業(yè)潔凈室（區）浮游菌的測試方法和GB/T 16294-2010醫藥工業(yè)潔凈室(區)沉降菌的測試方法進(jìn)行。以這兩個(gè)國標來(lái)實(shí)施監測制藥企業(yè)潔凈室的微生物，對大多數生產(chǎn)普通制劑或API的廠(chǎng)家來(lái)說(shuō)是沒(méi)有問(wèn)題的。
但是對于抗生素企業(yè)和部分制劑廠(chǎng)家來(lái)說(shuō)，僅僅按照這兩個(gè)國標推薦的兩種培養基大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）和沙氏瓊脂培養基（SDA）來(lái)監測潔凈室的微生物則是不全面的。在抗生素生產(chǎn)企業(yè)，其潔凈室內不可避免地混雜著(zhù)一定量的抗生素粉塵，如果沒(méi)有采取能夠消除抗生素粉塵對微生物生存和生長(cháng)的影響的措施，就采用國標的方法測試該環(huán)境中的微生物，得到的監測結果，不可避免的將是一個(gè)“假陰性”的結果；同樣，部分藥物的API對個(gè)別微生物也有不同程度的抑制或殺滅作用，要是不消除這類(lèi)影響微生物生存和生長(cháng)的環(huán)境因素，同樣會(huì )得到“假陰性”的結果。
現在國內絕大多數制藥企業(yè)環(huán)境監測中微生物取樣的培養基是檢驗員人工制作，培養基滅菌，澆制平板，預培養后剔除污染的平板后置冷藏箱內待用，保存期限一般不超過(guò)3周。采用這樣的方法進(jìn)行環(huán)境監測微生物的取樣，因為無(wú)法從根本上保證取樣平板的無(wú)菌性，得到的監測結果不可避免的是一個(gè)“假陽(yáng)性”的結果。
“假陰性”和“假陽(yáng)性”兩個(gè)結果都沒(méi)有真實(shí)的還原潔凈室內微生物的實(shí)際狀況。取樣測試的結果與潔凈室內微生物實(shí)際狀況出現了偏差。這樣的結果如果發(fā)生的A級或B級區，由此產(chǎn)生的眾多調查、重復測試等工作量，將會(huì )導致大量的經(jīng)濟損失。
“假陰性”和“假陽(yáng)性”兩個(gè)結果的產(chǎn)生，就是因為在環(huán)境監測微生物取樣測試時(shí)忽視了這樣兩個(gè)問(wèn)題，忽視了潔凈環(huán)境中存在的抑菌成分；忽視了取樣平板的無(wú)菌性。
一、潔凈環(huán)境中的抑菌成分的消除
制藥企業(yè)潔凈環(huán)境中的抑菌成分主要有這樣兩大類(lèi)：1、API；2、消毒劑殘留。
1、API主要分為這樣兩部分：抗生素和部分API
消除抗生素粉塵的殘留，采用的方法就是降解取樣時(shí)落在培養基平板上的抗生素，在取樣平板的培養基內添加一定量的酶，對于β-內酰胺類(lèi)抗生素，添加β-內酰胺酶（即青霉素酶）；對于頭孢類(lèi)抗生素，則添加頭孢菌素酶。
而API的消除，則主要依據：“中國藥典”2010年版 附錄109頁(yè) 附錄XI J 表1：“常見(jiàn)干擾物中和劑或滅活方法” 中所對應的中和或滅活方法，還有一個(gè)方法就是借鑒相關(guān)產(chǎn)品微生物檢驗方法驗證中所采取的中和或滅活方法來(lái)消除API的影響。
2、消毒劑殘留
制藥企業(yè)潔凈環(huán)境每天都在使用消毒劑，怎樣確定殘留的消毒劑沒(méi)有影響微生物的生長(cháng)？選擇什么樣的培養基可以最大限度的衡量潔凈室表面的微生物水平？理論知識告訴我們，卵磷脂、吐溫-80組合后能夠消除季胺類(lèi)化合物（苯扎溴銨、苯扎氯銨等）消毒劑的影響；卵磷脂、吐溫-80和L-組氨酸組合后能夠消除醛類(lèi)（甲醛、戊二銓等）和酚類(lèi)（苯酚、間苯二酚等）消毒劑的影響；硫代硫酸鈉能夠消除鹵素類(lèi)消毒劑（碘伏、碘酒等）的影響等等。
現在，國外制藥企業(yè)環(huán)境微生物監測時(shí)，用于潔凈室表面取樣的培養基大多為大豆酪蛋白+卵磷脂+吐溫-80瓊脂培養基（即TSAWLP）。選擇這樣的培養基就可以有效的降解可能殘留在潔凈室表面的消毒劑（主要是季胺類(lèi)化合物消毒劑）的殘留。
二、取樣平板的無(wú)菌性
《中國藥典》2010年版中對用于環(huán)境監測的培養基平板有明確的要求。用于環(huán)境監測的培養基須特別防護，最好要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養基，那么在使用前應進(jìn)行100%的預培養以防止外來(lái)的污染物帶到環(huán)境中以避免出現假陽(yáng)性的結果。［1］由此可見(jiàn)，在法規層面，對于制藥企業(yè)潔凈室環(huán)境中微生物測試的培養基提出了嚴格要求。要求在潔凈室取樣時(shí)采用無(wú)菌的預制培養基平板（即Ready to- use Culture Media Plate）取樣。
事實(shí)上，國外眾多的制藥企業(yè)用于潔凈環(huán)境測試的培養基平板，包括浮游菌、沉降菌取樣的90mm普通平板和表面取樣的55mm接觸平板都是無(wú)菌的預制平板培養基�！吨袊幍洹�2010年版中對用于環(huán)境監測的培養基的要求就是出自USP 〈1117〉MICROBIOLOGICAL BESTLABORATORY PRACTICES 章節。［2］
對比中國藥典和USP兩部藥典在環(huán)境監測培養基的具體要求，USP還特別強調了預培養之后必須要進(jìn)行的促生長(cháng)試驗（即Growth Promotion Testing），這里也凸顯了USP在強調避免微生物測試結果“假陽(yáng)性”的同時(shí)，更加關(guān)注的是微生物測試結果的“假陰性”�，F代微生物檢測領(lǐng)域，“假陰性”遠比“假陽(yáng)性”要可怕，制藥企業(yè)潔凈環(huán)境中微生物的檢測，使用無(wú)菌預制平板培養基，不僅完全杜絕了測試結果的“假陽(yáng)性”，同時(shí)也消除了“假陰性”的可能。也符合了中國GMP2010中大力提倡的風(fēng)險管理的理念。
三、制藥企業(yè)潔凈環(huán)境微生物監測的解決方案
針對制藥企業(yè)潔凈環(huán)境微生物監測中忽視的問(wèn)題，在設計一個(gè)潔凈室的微生物監測方案時(shí)，應該著(zhù)力避免這兩個(gè)問(wèn)題。在培養基中添加β-內酰胺酶或頭孢菌素酶是一定要做驗證的，就是要驗證所添加酶或中和劑的種類(lèi)和劑量能夠完全降解掉環(huán)境中的抑菌因素，從而真實(shí)還原本企業(yè)生產(chǎn)環(huán)境中可能存在的微生物的真實(shí)水平。避免環(huán)境監測微生物“假陽(yáng)性”或“假陰性”結果，另一行之有效方法就是采用無(wú)菌預制培養基平板（Ready to- use Culture Media Plate）取樣。
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