2015版藥典-- 微生物菌種鑒定評價(jià)

2015版藥典即將于今年12月實(shí)施，新版藥典逐步與國際接軌，修改或新增了微生物菌種管理、菌種檢定、菌種鑒定、菌株分型、菌株溯源、生產(chǎn)過(guò)程微生物監測、環(huán)境微生物監測等內容，對國內制藥企業(yè)在微生物監控管理方面提出了新的要求和挑戰，針對客戶(hù)需求，CICC對此進(jìn)行了梳理，以方便國內制藥企業(yè)在生產(chǎn)過(guò)程的微生物控制及新藥申報生產(chǎn)菌種管理方面快速理解和符合新版藥典的要求。

一、生物制品

生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規程

生物制品生產(chǎn)用菌毒種應采用種子批系統。生產(chǎn)用菌毒種應按各論要求進(jìn)行檢定。應對生產(chǎn)用菌毒種已知的主要抗原表位的遺傳穩定性進(jìn)行檢測，并證明在規定的使用代次內其遺傳性狀是穩定的。菌毒種經(jīng)檢定后，應根據其特性，選用凍干或適當的方法及時(shí)保存。保存的菌毒種傳代或凍干均應填寫(xiě)專(zhuān)用記錄。

生物制品各論中涉及的微生物檢定

培養物純度、培養特征、染色鏡檢、電鏡檢查、生化反應、血清學(xué)特性、對抗生素的抗性、毒力試驗、免疫力試驗、免疫原性試驗、抗原性試驗、目的基因核苷酸序列測定、質(zhì)粒DNA檢測、質(zhì)�？截悢�、DNA殘留、蛋白質(zhì)殘留等。

二、微生態(tài)活菌制品

微生態(tài)活菌制品總論

生產(chǎn)用菌種應按照“生物制品生產(chǎn)檢定用菌毒種管理規程”的有關(guān)規定建立種子批系統。

菌種的屬、種型分類(lèi)鑒定，應依據最新版伯杰氏細菌系統鑒定手冊（Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology）和伯杰氏細菌命名手冊(Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology）的有關(guān)規定，包括形態(tài)、生長(cháng)代謝特性檢查，原始種子或主種子還應作遺傳特性和抗生素敏感性等檢查。

三級種子批常規檢查包括培養特性及染色鏡檢、生化反應、毒性試驗， 除另有規定外，原始種子或主種子批還需進(jìn)行以下檢查：細菌代謝產(chǎn)物-脂肪酸測定、遺傳特性分析、抗生素敏感性試驗、穩定性試驗。

三、微生物鑒定指導原則（通則9204）

微生物鑒定是藥品微生物檢驗中的重要環(huán)節，藥典附錄相應章節中對檢出微生物的鑒定做了明確規定，如“非無(wú)菌產(chǎn)品的微生物檢查：控制菌檢查”（通則1106）中選擇培養基或指示培養基上發(fā)現的疑似菌落需進(jìn)行鑒定；對“無(wú)菌檢查法”（通則1101）的陽(yáng)性實(shí)驗結果中分離的微生物進(jìn)行鑒定，以判定試驗是否重試；藥品潔凈實(shí)驗室微生物監測和控制指導原則（通則9203）中建議對潔凈室和其他受控環(huán)境分離到的微生物進(jìn)行鑒定，以掌握環(huán)境微生物污染情況，有助于污染調查。此外，在藥品生產(chǎn)中，有時(shí)亦需對藥物原料、輔料、制藥用水、生產(chǎn)環(huán)境、中間產(chǎn)物和終產(chǎn)品中檢出的微生物進(jìn)行適當水平的鑒定。

微生物鑒定內容包括待檢菌的分離純化、氧化酶試驗、過(guò)氧化氫酶試驗、凝固酶試驗、培養特征、細胞特征、生理學(xué)特征、生化反應、抗生素敏感性、血清學(xué)特征、脂肪酸、微生物毒素、全細胞組分、DNA-DNA雜交、GC摩爾百分含量、PCR反應、16S rRNA序列、18S rRNA序列、MLST、DNA探針、核糖體分型、限制性酶切片段圖譜等。

菌株水平的鑒定在污染調查過(guò)程中非常有用，當產(chǎn)品中的微生物數量高于建議水平或出現異常高的微生物檢出率時(shí)尤其適用。菌株水平的鑒定在無(wú)菌工藝中也很重要，在無(wú)菌試驗結果陽(yáng)性和培養基灌裝等模擬工藝失敗時(shí)，必須對檢出的微生物進(jìn)行評估。菌株水平鑒定技術(shù)方法包括限制性核酸內切酶酶解、Southern雜交、PFGE、全基因組測序、血清型等。

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