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本法系依據在瓊脂培養基內抗生素對微生物的抑制作用，比較對調品與供試品對接種的試驗菌產(chǎn)生的抑菌圈的大小，檢查供試品中氨芐西林或四環(huán)素殘留量。
磷酸鹽緩沖液（P H6 .0 )的制備 稱(chēng)取磷酸二氫鉀8.0g、磷酸氫二鉀2.0g，加水溶解并稀釋至1000ml，經(jīng)121°C滅菌3 0分鐘。
抗生素I 號培養基的制備 稱(chēng)取胨6g、牛肉提取粉1.5g、酵母浸出粉6g，加人適量水溶解后，加人瓊脂13〜1 4 g ,加熱使之溶脹，濾過(guò)除去不溶物，加人葡萄糖lg , 溶解后加水至1000ml，調p H 值使滅菌后為6. 5〜6. 6; 分裝于玻璃管或錐形瓶中，經(jīng)115°C滅菌30分鐘，4℃保存。
對照品溶液的制備 取氨芐西林對照品適量，用O.Olmol/L鹽酸溶解并稀釋成每lm l中含氨芐西林10mg的溶液，精密量取適量，用磷酸鹽緩沖液稀釋成每lm l中含l.O μg的溶液。
取四環(huán)素對照品適量，用生理氯化鈉溶液溶解并稀釋成每lm l中含0. 125μg的溶液。
菌懸液的制備 （1 )金黃色葡萄球菌懸液用于檢測氨芐西林。取金黃色葡萄球菌（CMCC26003)營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于營(yíng)養瓊脂斜面上，35〜37°C培養20〜2 2小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水或0 .9%無(wú)菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。
(2 )藤黃微球菌（Mz'crococcwWi^eMS)懸液用于檢測四環(huán)素。取藤黃微球菌[CMCC(B)28001] 營(yíng)養瓊脂斜面培養物，接種于營(yíng)養瓊脂斜面上，置26〜2 7C培養2 4小時(shí)。臨用時(shí)，用0 .9%無(wú)菌氣化鈉溶液將菌苔洗下，備用。
檢査法 取直徑8cm或10cm的培養皿，注人融化的抗生素I I號培養基15〜20ml，使在碟底內均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層。取抗生素II號培養基10〜15ml置于1支50°C水浴預熱的試管中，加人0.5%〜1.5% (ml/ml) 的菌懸液300μl混勻，取適量注人已鋪制底層的培養皿中，放置水平臺上，冷卻后，在每個(gè)培養皿上等距離均勻放置鋼管(內徑6〜8mm、壁厚1〜2mm、管髙10〜15mm的不繡鋼管，表面應光滑平整），于鋼管中依次滴加供試品溶液、陰性對照溶液（磷酸鹽緩沖液）及對照品溶液。培養皿置37℃培養18〜22小時(shí)。
結果判定 對照品溶液有抑菌圈，陰性對照溶液無(wú)抑菌圈。供試品溶液抑菌圈的直徑小于對照品溶液抑菌圈的直徑時(shí)判為陰性；否則判為陽(yáng)性。
【附注】本試驗應在無(wú)菌條件下進(jìn)行，使用的玻璃儀器、鋼管等應無(wú)菌。
