醫藥工業(yè)潔凈室（區）浮游菌的測試方法

1.方法提要

   本標準采用的的方法是計數濃度法，即通過(guò)收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專(zhuān)門(mén)的培養基（選擇能證實(shí)其能夠支持微生物生長(cháng)的培養基），經(jīng)若干時(shí)間和適宜的生長(cháng)條件讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落計數，以判定該潔凈室的微生物濃度。

2.人員的職責及培訓

   潔凈室（區）的測試人員應進(jìn)行本專(zhuān)業(yè)的培訓并獲得相應資格后才能履行對潔凈室（區）測試的職責，其中包含涉及的衛生知識和基本微生物知識。

   潔凈室（區）的測試人員應選擇與生產(chǎn)操作的空氣潔凈度級別要求相適應的穿戴方式，外面的衣服不能帶進(jìn)100000級以上的區域。

3.儀器、輔助設備和培養基

   選擇合適的浮游菌采樣器，包括采用無(wú)油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養基表面的水分不被吹干。

   本測試需要具備儀器、輔助設備和培養基如下：

   a)浮游菌采樣器；

   b)培養皿；

   c)培養基（大豆酪蛋白瓊脂培養基、沙氏瓊脂培養基）

   d)恒溫培養箱；

   e)高壓蒸汽滅菌器。

4.浮游菌采樣器原理

   浮游菌采樣器一般采用撞擊法原理，可分為狹縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器。狹縫式采樣器由內部風(fēng)機將氣流吸入，通過(guò)采樣器的狹縫式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉的平板培養基表面上，附著(zhù)的活微生物粒子經(jīng)培養后形成菌落。離心式采樣器由于內部風(fēng)機的高速旋轉，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物的粒子有足夠的時(shí)間撞擊到專(zhuān)用的固形培養基條上，附著(zhù)的活微生物粒子經(jīng)培養后形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過(guò)一個(gè)金屬蓋吸入，蓋子上是密集的經(jīng)過(guò)機械加工的特質(zhì)小孔，通過(guò)風(fēng)機將收集的細小的空氣流直接撞擊到平板培養基表面上，附著(zhù)的活微生物粒子經(jīng)培養后形成菌落。

5測試要點(diǎn)

5.1必須按照測試儀器的檢定周期，定期對儀器作檢定。使用校驗合格，且在使用有效期內的儀器。

5.2測試儀器在未進(jìn)入被測區域時(shí)，若必需，則先清潔表面，或在相應的潔凈室內準備和存放（用保護罩或其他適當地外罩保護儀器）。

5.3在100級潔凈室內用紙時(shí)，上面應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級潔凈室內不能用鉛筆盒橡皮。

5.4使用測試儀器時(shí)應嚴格按照儀器說(shuō)明書(shū)操作。

5.4.1儀器開(kāi)機，預熱至穩定后，方可按儀器說(shuō)明書(shū)的規定對儀器進(jìn)行校正，同時(shí)檢查采樣流量，并根據采樣量設定采樣時(shí)間。

5.4.2采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩定的材料制造。

5.4.3采樣管?chē)澜麧B漏，內壁應光滑。

5.4.4采樣管的長(cháng)度應根據測點(diǎn)的高度定，盡量減少彎曲。

6培養皿

6.1一般采用90mm×15mm規格的培養皿�？筛鶕�所選用采樣器選擇合適的培養皿。

6.2離心式采樣器采用專(zhuān)用的固形培養條。

7培養基

   大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）或沙氏培養基（SDA）或其他用戶(hù)認可并經(jīng)驗證了的培養基。其配制方法見(jiàn)附錄B。

8恒溫培養箱

   必須定期對恒溫培養箱進(jìn)行校驗。

9測試步驟

9.1測試前儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。

9.1.1采樣器進(jìn)入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級潔凈室的采樣器宜預先放在被測房間內。

9.1.2用消毒劑擦凈培養皿的外表面。

9.1.3采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉盤(pán)以及罩子的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉盤(pán)。

9.1.4采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如果消毒劑對采樣管的外壁及內壁進(jìn)行消毒時(shí)，應將管中的殘留液倒掉晾干。

9.1.5采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤(pán)上放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或戴無(wú)菌手套操作。

9.1.6采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養皿，開(kāi)啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并檢查流量并根據采樣量調整設定采樣時(shí)間。

9.1.7關(guān)閉浮游菌采樣器，放入培養皿，蓋上蓋子。

9.1.8置采樣口于采樣點(diǎn)后，開(kāi)啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。

10培養

10.1全部采樣結束后，將培養皿倒置于恒溫培養箱中培養。

10.2采用大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）配制的培養皿經(jīng)采樣后，在30℃~35℃培養箱中培養，時(shí)間不少于2d；采用沙氏培養基（SDA）配制的培養皿經(jīng)采樣后，在20℃~25℃培養箱中培養，時(shí)間不少于5d。

10.3每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染�？擅颗�選定3只培養皿作對照培養。

11菌落計數

11.1用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數，標記或在菌落計數器上點(diǎn)計，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

11.2若平板上右2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計數。

12注意事項

12.1使用前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，培養基及培養皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。

12.2對培養基、培養條件及其他參數做詳細的記錄。

12.3由于細菌種類(lèi)繁多，差別甚大，計數時(shí)一般用透射光于培養皿背面或正面仔細觀(guān)察，不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須注意細菌菌落或培養基沉淀物的區別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

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