菌落總數中的誤操作及避免方法

   “菌落總數”是評價(jià)食品衛生質(zhì)量的重要指標，其檢測工作在某種程度上具有相當的不可比性，這就要求檢測人員要嚴格執行科學(xué)的操作程序。國家標準GB/T4789.2中只是簡(jiǎn)要提到了檢測程序，對實(shí)際操作過(guò)程中容易出現的問(wèn)題未作詳細說(shuō)明。本人通過(guò)實(shí)踐及多次對比試驗，現就檢測中容易出現的問(wèn)題，作一闡述。

樣品的制備和稀釋倍數的選擇

   對于冰凍的樣品，在接種前要放到0~4℃的冰箱中解凍。固體樣品要用滅菌刀或鑷子從不同部位采取試驗材料并混合，在無(wú)菌操作下充分研細，混勻，做成均勻稀釋液。樣品制備的整個(gè)過(guò)程都應在無(wú)菌狀態(tài)下進(jìn)行，以防污染。任何樣品在打開(kāi)包裝前，都要在取樣開(kāi)口處的周?chē)�表面進(jìn)行消毒。以上過(guò)程的誤操作是：冰凍樣品的解凍時(shí)間過(guò)長(cháng)，導致細菌增殖，使實(shí)測結果偏高；固體樣品取樣不均衡，稀釋液未充分混勻，使所測結果準確度降低；取樣時(shí)未進(jìn)行外包裝消毒，引起樣品污染。

   充氣飲料應在無(wú)菌條件下進(jìn)行排氣；酸性樣品用經(jīng)過(guò)滅菌的20~30%碳酸鈉溶液調整pH值到中性；含鹽量較高的樣品應用滅菌蒸餾水進(jìn)行稀釋。誤操作是：充氣飲料未經(jīng)排氣，使樣品接種量偏低；酸性樣品未調pH值，使不適合酸性狀態(tài)下生長(cháng)的細菌受抑制；高鹽樣品仍用生理鹽水進(jìn)行稀釋?zhuān)�使不適于高鹽狀態(tài)下生長(cháng)的細菌受抑制，結果均使實(shí)測值偏低。

  不同的食品其“菌落總數”的檢出限量也不一致。醬油、奶制品、熟肉制品等細菌含量一般偏高，稀釋度可相應選擇較大的， 如1:100和1:1000等，而飲料、糕點(diǎn)類(lèi)樣品中細菌量偏低，稀釋度應選擇較小的，如液體樣品可選原樣， 固體樣品選1:10等。誤操作是或者選擇的稀釋度過(guò)大，使得菌落生長(cháng)稀少，或者稀釋度過(guò)小，菌落生長(cháng)密度高，難以計數，導致實(shí)測結果或偏高或偏低。

接種、培養過(guò)程中應注意的問(wèn)題

   接種時(shí)，用移液管吸取稀釋液不應用吸球，而要用管口上部塞有脫脂棉球的經(jīng)過(guò)高溫烘烤的移液管，并且用嘴吸取，以防產(chǎn)生交叉污染。稀釋液加入平皿后，應在盡可能快的時(shí)間內傾入瓊脂（傾倒瓊脂時(shí)，應保證瓊脂溫度在50~60℃，溫度過(guò)高，易殺死細菌；溫度過(guò)低，則瓊脂提前凝固，導致檢測失�。�，并立即在桌面上推旋平皿，使樣液與瓊脂混合均勻，切忌推旋動(dòng)作過(guò)大，將瓊脂濺到平皿蓋上，影響測定結果。

   平皿內瓊脂凝固后，不要長(cháng)久放置后才翻轉平皿培養，而應在瓊脂凝固后立即將平皿翻轉予以培養，這樣可避免菌落蔓延生長(cháng)，難以計數。

   配制、分裝稀釋液或傾注平板不能在日光直射下進(jìn)行，以防強烈的日光將細菌殺死。

   在培養時(shí)，恒溫培養箱的溫度不能過(guò)高，以免出現蔓延生菌的趨勢，但也要防止因通風(fēng)和空氣循環(huán)而造成的培養基太干，而影響細菌的正常生長(cháng)。

滅菌消毒過(guò)程中應注意的問(wèn)題

   細菌檢測過(guò)程中所用到的一切用具和培養基都需經(jīng)過(guò)滅菌程序。接種室要經(jīng)常用消毒液進(jìn)行地

面、墻面和桌面的消毒處理。實(shí)驗進(jìn)行前，還要經(jīng)紫外燈照射殺菌。檢測人員的實(shí)驗服也要經(jīng)常用消毒液浸泡消毒。凡是能在高溫下烘烤的玻璃器皿、金屬器械等都應用專(zhuān)用紙包好并在170℃烘烤3小時(shí)以上，以徹底滅菌。培養基和液體試劑，則要在高壓鍋內進(jìn)行滅菌。高壓鍋使用時(shí)應注意在升壓前要放凈鍋內殘存的空氣，以保證所需的壓力，達到滅菌效果。滅菌效果的好壞可通過(guò)空白試驗確定�？瞻自囼炗锌諝饪瞻�、稀釋用水空白、器皿空白等，完美的空白試驗平板上應該無(wú)細菌生長(cháng)。

菌落計數和檢測結果報告中應注意的問(wèn)題

   菌落計數在完成培養后應立即進(jìn)行，以防細菌繼續生長(cháng)蔓延影響實(shí)測結果。由于不小心、視力疲勞或菌落沒(méi)有辨認好，均可導致錯誤的結果，因此，檢測人員在計數時(shí)應采取多人同時(shí)進(jìn)行計數

的方法，以避免這種情況造成的誤差。

如果所有稀釋度的平板均無(wú)細菌生長(cháng)，則檢測報告應以最低稀釋度報出，如最低稀釋度為1，則報為＜1；若最低稀釋度為1:10，則報為＜10，而不能報為“未檢出”。

   以上所述，均是在實(shí)際檢測“菌落總數”過(guò)程中易發(fā)生誤操作之處。只有檢測人員嚴格按要求進(jìn)行實(shí)際操作，避免產(chǎn)生上述錯誤，才能保證科學(xué)、準確地得出符合樣品實(shí)際的檢測結果，體現技術(shù)監督檢測工作的科學(xué)性和公正性。

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