藥品微生物學(xué)檢驗技術(shù)

第一節 藥品微生物檢驗結果的影響因素

微生物的生長(cháng)受很多因素的影響，特別是藥品中污染的微生物尤為如此。藥品微生物檢驗是檢測藥品中具有繁殖能力的活細胞，這些活的微生物在藥品中處于不穩定的狀態(tài)，它的檢出與否受很多因素的影響，主要影響因素有如下幾點(diǎn)：

一、 供試品組分

由于供試品本身的特性，可能含有具有抑菌作用的組分成分，如抗生素中藥中的黃蓮、牛黃、冰片等。另外，很多供試品中加入的抑菌劑或防腐劑用于防止供試品中的微生物再污染和再生殖，以及增溶劑、乳化劑、抗氧劑等其他輔料，這些組分在一定濃度下對 微生物具有抑制作用，并可能對 藥品中污染的微生物造成不同程度的損傷。供試品中污染的微生物在這些物質(zhì)的影響下有可能檢不出，這時(shí)，它們雖然被 抑制甚至受到損傷，但并未死亡，在一定條件在塔門(mén)還可以穩定地存活一段時(shí)間，當微生物生存環(huán)境改變時(shí)，如抑菌成分消除或濃度降低時(shí)，這些微生物便可以復蘇并繁殖，患者使用后同樣可危及人體健康。對于這些藥品，如按常規方法進(jìn)行微生物檢驗，往往顯示假陰性結果。

除此之外，在藥品微生物檢驗中，由于原料來(lái)源不同，特別是中藥制劑，或者生產(chǎn)工藝的差別，使用的輔料不同等原因，使不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的同一產(chǎn)品，甚至是同一廠(chǎng)家生產(chǎn)的同一產(chǎn)品不同批次的藥品往往對同一中微生物的生長(cháng)也有 不同程度的影響。

  從理論上講，許多藥品含有影響微生物生長(cháng)的物質(zhì)，許多試驗也表明了這一點(diǎn)，表12-1列出了已知試驗菌的菌數在不同藥品中的回收率，有的藥品幾乎對所有試驗菌均有很強的抑制或殺死作用。因此，供試品的組分及其濃度直接影響供試品中污染微生物的檢查結果準確與否。

表12-1  回收率小于70%樣品的各試驗菌回收試驗結果

一、 微生物的多樣性及復雜性

自然界中微生物的種類(lèi)和生存形式是多種多樣的，藥品的種類(lèi)繁多，劑型多樣，其污染的微生物也是多樣而復雜的，即使是同一產(chǎn)品的生產(chǎn)區域，所污染的微生物種類(lèi)也不盡相同；同一產(chǎn)品因存放的時(shí)間和條件不同，其中污染微生物存在的形式可能改變（菌體或孢子等狀態(tài)）。不同類(lèi)型的微生物及不同的存活狀態(tài)對環(huán)境的抗性是不同的，采用同一檢查方法未必是適宜的。

藥品中污染的微生物，特別是生產(chǎn)前期污染的，受到原料處理、加工、加熱等過(guò)程的影響，均可能受到一定程度的損傷。這些受損但尚存活的微生物可能遭受外界環(huán)境的抑制，只有在適宜的條件下使其修復或從抑制狀態(tài)中復蘇后，才能正常生長(cháng)。否則，這些微生物就很難檢出。

二、 藥品微生物的檢查方法

檢查方法包括供試液制備方法和微生物檢測方法，它是保證檢驗結果準確可靠的最重要前提。

    微生物檢測時(shí)，首先進(jìn)行供試液的制備，不同特性的供試品，應采用不同的供試液制備方法，如水溶性供試品直接加稀釋劑制備即可；不溶水的固體供試品采用勻漿或加混懸劑制成均勻的混懸液；非水溶性油劑或軟膏劑，因其與水難溶，使其中污染的微生物難與培養基接觸或因缺氧而無(wú)法生長(cháng)，需采用乳化劑使成均勻分散的乳濁液；有抑菌成分的供試品客加入消除抑菌成分的中和劑；離心沉淀及薄膜過(guò)濾消除抑菌成分的方法等，這些物理或化學(xué)的供試液制備方法在進(jìn)行過(guò)程或多或少影響著(zhù)供試品中微生物的回收。

    同一份供試液采用不同的微生物檢測方法，如常規法、培養基稀釋法、薄膜過(guò)濾法、MPN法等，其檢測的結果可不同，因為其中所含的供試品濃度不同，特別是有抑菌作用的供試品。

三、 檢驗條件

藥品中污染的微生物的檢驗是基于微生物在培養基中的生長(cháng)情況進(jìn)行結果判斷。因此，培養基質(zhì)量、PH、培養溫度、培養時(shí)間及供氧情況等均影響微生物的生長(cháng)，導致了檢驗結果的差異。

除此之外，試驗人員操作的誤差，不同實(shí)驗室的誤差等原因，均可影響微生物的檢出結果。

第一節 藥品微生物檢驗方法驗證的意義及概況

一、 藥品微生物檢驗方法驗證的意義

正因為藥品中污染的微生物檢查結果受很多很多結果的影響，加上生物本身的誤差就很大。這些將直接影響樣品中微生物的回收（見(jiàn)表12-2），從表12-2看，試驗樣品中，試驗菌的回收率小于10%、50%、70%及80%的樣品分別占25.3%、33.9%、35.5%及40.3%。試驗結果表明了按現版的藥典方法測定藥品中污染的微生物，對有些樣品來(lái)說(shuō)，其結果不能真實(shí)反映樣品的污染狀況。在這種情況下，該方法也及時(shí)去其原有的意義。另外，任何檢查法均有它的局限性，同一種供試品的微生物限度檢查因采用的檢查方法和檢查條件不同，導致了不同的菌數測定結果，它將直接影響著(zhù)檢驗結果的判定（見(jiàn)表12-3）。因此，在進(jìn)行藥品中微生物檢驗中，只有在各檢測條件均適宜時(shí)，即在該檢驗條件下的樣品濃度不足以抑制污染微生物的生長(cháng)，使供試瓶中污染的微生物得以真實(shí)的反映，從而保證結果的哦科學(xué)性準確性。因此，其他分析方法一樣，藥品的無(wú)菌檢查和微生物限度檢查也應證明所采用的方法是適宜的。確認所采用的方法適合于樣品的微生物污染的檢查，方可使用。

表12-2 試驗菌在樣品中回收情況

注1：有的樣品只測定部分試驗菌株。

注2：指各樣品至少有一株的回收率規定。

表12-3  同一樣品不同檢測方法的微生物回收率情況

二、國外藥典藥品微生物檢驗方法驗證的概況

在美國藥典、歐洲藥典、日本藥局對無(wú)菌檢查法和微生物限度檢查法協(xié)調之前，USP、BP、EP、JP對無(wú)菌檢查法和微生物限度檢查方法的驗證要求提出要求。USP24版規定了在進(jìn)行無(wú)菌檢查和微生物限度檢查時(shí)，應如何進(jìn)行藥物中微生物回收的驗證試驗，同時(shí)要求在檢查時(shí)，應消除供試品的抑菌活性，以保證試驗結果的可信性；USP24版的無(wú)菌檢查法中還規定了無(wú)菌檢車(chē)時(shí)應進(jìn)行樣品的抑細菌、抑真菌試驗。BP1993版無(wú)菌檢查法中雖未單列抑細菌、抑真菌試驗，但在培養基促生長(cháng)試驗中含有加供試品組以觀(guān)察供試品是否含有抑菌活性，事實(shí)上是培養基促生長(cháng)試驗與抑細菌、抑真菌試驗同時(shí)進(jìn)行；BP1998版就比較詳細的規定應如何及何時(shí)進(jìn)行藥品無(wú)菌檢驗法的驗證，在微生物限度檢查法中也同時(shí)要求應進(jìn)行培養基質(zhì)量和檢查方法的確認。

上一篇：食品中沙門(mén)菌的分離和鑒定（加拿大HPB法）

下一篇：微生物毒素