藍靛果種苗組培快繁技術(shù)規程

1.1　

藍靛果

 [Lonicera edulis Turcz.]別名藍靛果忍冬、藍果忍冬、藍果，俗稱(chēng)山茄子、羊奶子、黑瞎子果，為忍冬科忍冬屬多年生落葉小灌木，果實(shí)為藍色小漿果，具有很高的食用與保健價(jià)值。

1.2　

植物組織培養

在無(wú)菌條件下，將離體的植物器官、組織、細胞或原生質(zhì)體等，培養在人工培養基和人工控制的環(huán)境中，使其再生新植株的過(guò)程和技術(shù)。（GB/T 16620）

1.3　

外植體

用于植物組織培養的離體植物器官、組織、細胞以及原生質(zhì)體等。

1.4　

培養基

根據植物營(yíng)養原理與植物組織培養的要求人工配制的營(yíng)養基質(zhì)。

1.5　

培養基母液

按試劑種類(lèi)和性質(zhì)分別配制的高于培養基配方濃度的溶液。

1.6　

植物生長(cháng)物質(zhì)

調節植物生長(cháng)發(fā)育的物質(zhì)，包括植物激素和植物生長(cháng)調節劑。常用的植物生長(cháng)物質(zhì)有生長(cháng)素類(lèi)似物IBA（吲哚丁酸）、6-BA（6-芐氨基腺嘌呤）、NAA（萘乙酸）、KT（激動(dòng)素）等。

1.7　

外植體滅菌

將外植體表面的微生物徹底殺死并盡可能少傷害外植體組織和表層細胞的過(guò)程。

1.8　

接種

將滅菌后的外植體在無(wú)菌條件下接入培養容器內的培養基中的過(guò)程。

1.9　

誘導培養

將滅菌后的外植體接種到誘導愈傷組織等器官培養基中進(jìn)行培養的過(guò)程。

1.10　

繼代培養

培養過(guò)程中將培養材料周期性地分株、分割等操作后，轉接入新鮮培養基中繼續培養的過(guò)程。

1.11　

生根培養

將不定芽轉移到生根誘導培養基中誘導生根，生成完整植株的過(guò)程。

1.12　

移栽

組培苗在培養瓶中長(cháng)出一定數量的根或根原基后，從瓶中取出移植到基質(zhì)中的過(guò)程。

2　實(shí)驗設備

2.1　

滅菌設備

高壓蒸汽滅菌鍋、紫外燈。

2.2　

接種設備

超凈工作臺、槍式鑷子、眼科用解剖剪、解剖刀、酒精燈等。

2.3　

培養設備

培養容器瓶（罐頭瓶）、培養架、空調、照明燈管。

2.4　

實(shí)驗設備

電子天平（0.01mg）、冰箱、pH 5.0～7.0精密試紙、酸度計、溫濕度表、照度計、燒杯、試劑瓶、量筒、容量瓶、移液槍等。

3　環(huán)境設備消毒滅菌

3.1　

接種室消毒滅菌

接種前用紫外燈照射30min，每周用高錳酸鉀及甲醛混合薰蒸。

3.2　

培養室消毒滅菌

每周用高錳酸鉀及甲醛混合薰蒸。 

3.3　

超凈工作臺的消毒滅菌

接種前用紫外燈照射30min，并用70％酒精擦拭臺面，定期清洗超凈工作臺過(guò)濾膜。

3.4　

接種器具的消毒滅菌

使用前將槍式鑷子、解剖剪、培養皿、解剖刀進(jìn)行高溫蒸汽消毒；接種過(guò)程中采用酒精燈灼燒消毒。

4　組培育苗

4.1　

培養基制備

4.1.1　

母液配制及保存

選用化學(xué)純或分析純的化學(xué)藥品，根據MS培養基配方，分別配制大量元素（50倍）、微量元素（100倍）、鐵鹽（200倍）、有機物（100倍）、植物生長(cháng)調節物質(zhì)（0.1～0.5mg/mL）幾種化合物的母液（見(jiàn)附件A.1和附件A.2），將母液保存在4℃的冰箱里。

4.1.2　

培養基配制

根據培養基配方需求，每升培養基中分別加入瓊脂粉（6.5g）、蔗糖（30g）和各類(lèi)母液，依次溶解于蒸餾水，定容后用0.1mol/L HCl或0.1mol/L lNaOH溶液調節pH=5.8，定量分裝至培養瓶中并封口，制備成培養基，備用。培養基配制流程見(jiàn)下圖。

圖

4.2　

培養基滅菌

瓶裝培養基在10h內完成滅菌，滅菌方式采用高壓蒸汽滅菌，在壓力0.105MPa、溫度121℃條件下滅菌20min～30min。鍋內的滅菌物以不超過(guò)鍋的容量3/4為宜，高壓滅菌時(shí)鍋內使用蒸餾水。

4.3　

培養基保存

滅菌后的培養基放入接種室，常溫條件下7d內使用，2℃～4℃條件下14d內使用。培養基應保存于潔凈環(huán)境中，注意避光和防塵。

4.4　

外植體接種

4.4.1　

外植體的選擇

選擇生長(cháng)健康、強壯的植株作為采樣母株，剪取母樹(shù)下部的半木質(zhì)化的莖段作為外植體，采樣時(shí)間宜選擇晴天或露水干后采集。

4.4.2　

外植體滅菌

先將外植體用洗滌劑作表面清洗，清除表面的塵土，再將外植體用流水沖洗30min后，將外植體放入消毒瓶中。把裝有外植體的消毒瓶放入超凈工作臺，在超凈工作臺上打開(kāi)裝有外植體的消毒瓶，倒入70%酒精并搖晃消毒瓶，浸泡消毒10s，倒去酒精，用無(wú)菌水沖洗外植體3次～5次；然后用0.1% HgCl2浸泡8min，無(wú)菌水沖洗3次～5次，用無(wú)菌濾紙吸干外植體表面的水分。

4.4.3　

外植體切割

將表面消毒后的外植體切割，接入培養基中。莖在接種前用手術(shù)剪刀剪去兩端，長(cháng)1.0 cm～2.0cm。

4.4.4　

外植體接種

操作時(shí)，先將培養瓶的封口膜輕輕取下，放在一邊，將培養瓶口在酒精燈外焰上旋轉灼燒消毒，殺死瓶口的微生物。將槍式鑷子在酒精燈上灼燒消毒并冷卻后，將外植體接種到培養基中，每個(gè)培養瓶放3個(gè)外植體，接種后蓋上封口膜，并標注日期。

4.5　

組培苗培養條件

培養室的溫度控制在25℃±3℃，相對空氣濕度控制在70%～80%，光照強度為27μmol•m-2•s-1～36μmol•m-2•s-1，光照時(shí)間為12h/d。

4.5.1　

誘導培養

將外植體接種到誘導培養基中，誘導培養基選用：MS基本培養基+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L，培養20d～25d后進(jìn)行繼代增殖培養。

4.5.2　

繼代增殖培養

外植體經(jīng)誘導培養生成愈傷組織或叢生芽，轉接至增殖培養基中繼代培養，繼代增殖培養基可選用：MS基本培養基+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.3mg/L+KT 1.0 mg/L，培養30-35d。

4.5.3　

生根培養

選取培養瓶中長(cháng)度1.5cm～3.0cm生長(cháng)健壯的芽接種至生根培養基中，生根培養基可選用：1/2MS基本培養基+NAA 0.5mg/L+IBA 1.0mg/L。培養25d～35d,組培苗生長(cháng)過(guò)程中在基部會(huì )出現白色嫩根，25d后平均生根數3條以上，根長(cháng)約在1.0cm～4.0cm。

4.6　

煉苗

4.6.1　

煉苗標準

當組培幼苗基部長(cháng)出3條以上長(cháng)1.0cm～4.0cm的新根、苗高3～8cm，即可進(jìn)行煉苗處理。

4.6.2　

組培苗馴化

將裝組培苗的培養瓶從培養架上輕輕取下，迅速轉移到日光溫室中，自然散射光下煉苗，溫度控制在20℃～25℃，每天中午在培養瓶周?chē)鷩姙㈧F水，以保濕降溫，封口煉苗1d～2d。

4.6.3　

開(kāi)瓶鍛煉

封口煉苗后打開(kāi)瓶口，向瓶?jì)茸⑷氤�過(guò)培養基表面0.5cm高的自來(lái)水，溫度控制在20℃～25℃，

2d～4d后即可移栽。

4.6.4　

組培苗質(zhì)量與分級

按照株高高矮分級，分2級，即苗高≦5cm和﹥5cm。

4.7　

移栽苗

用手指或鑷子輕輕取出組培苗，用清水洗去苗基部的培養基，移栽至裝有黑壤土、草碳土和細河沙（混合比例為2：1：1）的混合基質(zhì)的育苗盤(pán)中，育苗基質(zhì)中按每立方米基質(zhì)加入1kg磷酸二氫銨。育苗盤(pán)規格為35cm×50cm，育苗盤(pán)四壁高度不能低于7cm，育苗基質(zhì)放入育苗容器并澆透水后，厚度應不小于5cm。

4.8　

移栽苗管理

育苗期保持育苗基質(zhì)見(jiàn)干見(jiàn)濕，育苗水分管理按照GB/T 6001進(jìn)行。溫室空氣濕度應保持70%～80%，溫度應在18℃～25℃。

4.9　

病蟲(chóng)害管理

藍靛果苗期病害主要為立枯病。主要防治方法：育苗前使用0.05%炭疽福美作藥土防治，或50%多菌靈、70%甲基硫菌靈等作藥土防治，每平方米用藥8～9克；幼苗發(fā)病前期噴藥防治，選用70%土菌消（惡霉靈）可濕性粉1000倍液，或70%甲基硫菌靈可濕性粉劑800倍液，隔周?chē)娛�，共噴兩次�?/span>

蟲(chóng)害主要是螞蟻。防治方法：應在育苗床周邊撒一圈百蟲(chóng)靈等驅蟻藥。

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