生化檢驗中的各種空白概念

       對所謂“試劑空白”“樣本空白”“水空白”“杯空白”等“空白”名詞,有些同行可能感到困惑.特此匯集了一下各種言論(包括本論 壇高手們發(fā)表的一些意見(jiàn))并結合自己的理解,總結如下,希望大家指正和補充:

　　空白概念區別要點(diǎn):**空白=只含**的空白（吸光度）

1、試劑空白

　　由于生化測試測量的吸光度為相對吸光度，所以從理論上說(shuō)，所有終點(diǎn)法的測試都需要把試劑本身的吸光度扣除。試劑本身的吸光度就是 試劑空白。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把樣本換成蒸餾水來(lái)測量。

　　在傳統手工方法中,每次測定都要做至少三個(gè)管:測定管、標準管、空白管。其中空白管是試劑加蒸餾水，測出來(lái)也就是試劑空白。因為 操作環(huán)境、儀器狀態(tài)、試劑穩定性等變異，所以要求每次都要測定試劑空白，稱(chēng)為實(shí)時(shí)試劑空白。

　　在全自動(dòng)分析儀上，大體上是模擬手工操作。但許多全自動(dòng)分析儀為追求速度，在設計上采用一些折中方法來(lái)測定試劑空白。以日立全系 列生化儀為例。該系列分析儀是做不了實(shí)時(shí)試劑空白，因為它們全是先加入樣本后加試劑，為了折中，只好在定標時(shí)做一個(gè)試劑空白，保 存起來(lái)，需要扣除試劑空白時(shí)再減這個(gè)預先保存的值。這種做法，對于比較穩定的試劑來(lái)講，對結果影響不大。

　　通俗的講，日立的儀器工作流程中首先是將標本加入到比色杯中，然后依次加入R1試劑、R2試劑，所以試劑空白在每個(gè)測定項目曲線(xiàn) 中是無(wú)法看到的。但是7170從CALIBRATION中是可以看到的，S1ABS就是代表試劑空白吸光度，在CALIBRAT ION畫(huà)面里的下方找到Reaction Monitor（反應監察），其中STD(1)就是代表試劑空白反應曲線(xiàn).為了減小誤差，日立儀器會(huì )連續做兩次測定，所以你看到 FIRST和SECOND兩條，計算時(shí)是取他們的平均值。做試劑空白目的之一就是觀(guān)察試劑是否穩定，積極采取措施糾正。對于日立 的這種試劑空白測定很多儀器都采用這種方法，也叫做試劑空白校準。

　　總的說(shuō)來(lái)，自動(dòng)生化儀上的試劑空白一般表現為零點(diǎn)吸光度，該吸光度是通過(guò)校準確立的。

2、樣本空白

　　由于溶血、脂血、黃疸等情況，會(huì )導致樣本本身的吸光度對測試結果造成影響。所以對樣本本身吸光度的測量，即樣本空白，可以去除這 方面的影響。測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量，把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來(lái)進(jìn)行測量。自動(dòng)生化儀上，很難界定樣本空白。 與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點(diǎn):

　　a).在雙試劑測定時(shí)，加入試劑1和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白，所以有單試劑不能扣除樣本空白的說(shuō)法。

　　b).現在優(yōu)質(zhì)的試劑的抗干擾能力都比較強，比如有些雙試劑，R1加入后先和樣本孵育一段時(shí)間，將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應 掉，再加入R2開(kāi)始測定反應。在一定范圍內都可以消除樣本空白。

　　c).現代全自動(dòng)生化儀大多采用雙波長(cháng)測定.雙波長(cháng)測定的原則是根據干擾組分和待測物質(zhì)吸收光譜的峰形特征，選擇兩個(gè)波長(cháng)和 ，使干擾組分在這兩個(gè)波長(cháng)處的吸光系數相等，而使待測物質(zhì)在兩波長(cháng)處的吸光系數有顯著(zhù)差別。以?xún)刹ㄩL(cháng)分別測定分析溶液的吸光度， 以?xún)蓚�(gè)吸光度值之差(△A)計算。這也可以扣除一部分樣本空白.

　　d).有些儀器,例如日立系列,有專(zhuān)門(mén)的“血清信息”功能的設置。做法都是單 獨占用一個(gè)空白通道來(lái)計算，這也叫做樣品空白校準。

3、水空白

　　比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意義主要是對光路系統進(jìn)行檢查和校正，如光源，比色杯等，同時(shí)在計算中起到消除“杯差”的 作用。日立7060中的Cell Blank（杯空白）測定的就是水空白。

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