游泳池水微生物檢驗標準-大腸菌群測定

第一法:多管發(fā)酵法

培養基和試劑

乳糖蛋白胨培養液

伊紅美藍瓊脂

革蘭氏染色液

推測性試驗

1、在2個(gè)裝有50ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養液的大試管或燒杯內個(gè)加入水樣100ml。

2、在10支裝有5ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養液的試管中各加入水樣10ml。

3、輕搖試管使液體充分混勻，置36℃±1℃培養箱中，培養24h。

4、觀(guān)察每管是否產(chǎn)氣，如果不產(chǎn)氣則報告為大腸菌群陰性；反之則推測性試驗陽(yáng)性，需做進(jìn)一步的證實(shí)試驗。

證實(shí)試驗

1、平板分離

自推測性試驗的陽(yáng)性管中取一接種環(huán)培養液，接種到伊紅美藍瓊脂平板上，置于36℃±1℃培養箱培養18~24h，觀(guān)察菌落形態(tài)，典型的大腸菌群菌落為黑紫色或紅紫色，具有金屬光澤。

2、復發(fā)酵試驗

挑取可疑大腸菌群菌落1或2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，于36℃±1℃培養箱中，培養24h。

3、凡乳糖發(fā)酵管最終產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌，為大腸菌群陽(yáng)性，記下證實(shí)試驗的陽(yáng)性管數，查總大腸菌群（MPN）檢索表得出1000ml水樣中大腸菌群的MPN值。

第二法：濾膜法

1、濾膜滅菌：將濾膜放入含蒸餾水的燒杯中，煮沸滅菌三次，每次15min，前兩次煮沸后需更換水洗滌2~3次，以除去殘留溶劑。

2、濾膜滅菌：用121℃高壓滅菌20min或用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌。

3、水樣過(guò)濾：用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在濾床上，固定好濾器，將100ml水樣（如水樣含菌數較多，可減少濾水樣或將水樣稀釋?zhuān)┳⑷霝V器中，打開(kāi)濾器閥門(mén)，在一0.5×105  Pa（-0.5大氣壓）下抽濾。

4、培養：水樣濾完后，再抽氣約5s，關(guān)上濾器閥門(mén)，取下濾器，用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在乳糖瓊脂分離培養基上，濾膜截留細菌面向上，濾膜應與培養基完全貼緊，兩者之間不得留有氣泡，然后將平皿倒置，放入36℃±1℃恒溫箱內培養18~24h。

5、挑取濾膜上符合下列特征的菌落進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。

紫紅色，具有金屬光澤的菌落；

深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；

淡紅色，中心色較深的菌落。

6、將革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌接種到乳糖蛋白胨培養液中，于36℃±1℃培養48h，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性。

7、計算濾膜上生長(cháng)的證實(shí)為大腸菌群的菌落數，在乘以10即為每1000ml水樣中的大腸菌群數。   

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