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這篇的廠(chǎng)房設施寫(xiě)的重點(diǎn)不在設施改造，更著(zhù)重于微生物實(shí)驗室的廠(chǎng)房設施所創(chuàng )造的實(shí)驗環(huán)境如何符合15版藥典的管理要求。
在15版藥典的指導原則中有兩份指導原則有所提及，分別是9203《藥品微生物實(shí)驗室質(zhì)量管理指導原則》中的“環(huán)境”項下及9205《藥品潔凈實(shí)驗室微生物監測和控制指導原則》的內容。
一、 微生物實(shí)驗室的布局
實(shí)驗室布局的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗過(guò)程對環(huán)境及人員造成危害。通常，實(shí)驗室按功能劃分為潔凈區、活菌操作區和其他功能區，同時(shí)應根據實(shí)驗目的，在時(shí)間和空間上有效分隔各類(lèi)實(shí)驗活動(dòng)，將交叉污染的風(fēng)險降到最低。
1、 潔凈區
一般微生物實(shí)驗室的潔凈區設置有微生物限度檢查潔凈室及無(wú)菌檢查潔凈室，兩個(gè)實(shí)驗區域的空調系統應獨立，微限操作有一定菌數數量級的樣品，無(wú)菌操作有無(wú)菌的樣品，本身實(shí)驗概念上不同，必須設置專(zhuān)屬的工作區域。
微生物限度檢查潔凈室的潔凈級別藥典要求是不低于D級背景下的B級單向流空氣區域內進(jìn)行，一般大家還是喜歡使用超凈臺作為實(shí)驗臺，根據10版藥典的規定，實(shí)驗室內微限室是達到C+A的水平，個(gè)人建議可以將微限室降級為D級潔凈室，但是其空調系統的配制可達到C級凈化水平，因為一方面更多的企業(yè)選擇在無(wú)菌檢查使用隔離器，也就是無(wú)菌檢查室會(huì )傾向使用控制級別較低的D級潔凈背景管理，便于統一管理；另外D級潔凈室比C級的風(fēng)量及相應的換氣次數要低，可以降低能耗，節約潔凈區運行成本。
在D級潔凈室內置上超凈臺或生物安全柜均可，個(gè)人傾向生物安全柜，這也是中檢所老師推薦的，理由就是既保護樣品又保護實(shí)驗人員，舉個(gè)例子，有個(gè)公司的超凈臺是平流式的，正好生產(chǎn)的是促進(jìn)胃動(dòng)力的藥品，生產(chǎn)車(chē)間使用超凈臺對產(chǎn)品進(jìn)行操作的人員每天中午的飯量都很大，最后調查因為吸入藥品粉末所致，其實(shí)這樣的藥品對于人并不算有太大影響，但是如果配制垂直流的生物安全柜并做成室外排風(fēng)，那這樣是不是更人性化呢，當然檢品到實(shí)驗室這一道其檢驗量原本就不多，對實(shí)驗人員一般不會(huì )帶來(lái)什么，但我更相信，在這樣更科學(xué)化人性化的管理理念下，實(shí)驗人員也會(huì )更認真的處理檢品，這不就是企業(yè)希望帶來(lái)的結果嗎。
無(wú)菌檢查室的級別要求是應在B級背景下的A級單向流潔凈區域或隔離系統中進(jìn)行，之前說(shuō)了現在更多的企業(yè)傾向于購買(mǎi)隔離系統，讓C級的潔凈室改造成B級的潔凈室也不是那么容易的，更何況隔離系統更能夠避免實(shí)驗假陽(yáng)性的發(fā)生，無(wú)菌檢查實(shí)驗通常是放行的最后時(shí)限也是無(wú)菌制劑放行時(shí)的相當重要的參考數據之一，而且也是出現陽(yáng)性結果原因非常難查的實(shí)驗之一，我個(gè)人也推薦大家使用隔離器，但是一定要注意必須進(jìn)行嚴格系統的驗證，避免假陰性情況出現，寧可錯殺一千不能放過(guò)一個(gè)陽(yáng)性檢品�。。�！
背景的話(huà)在9206《無(wú)菌檢查用隔離系統驗證指導原則》中指出“無(wú)菌檢查用隔離器安裝環(huán)境的潔凈度要求建議不低于我國現行GMP中D級空氣潔凈度要求，安裝隔離器的房間應限制無(wú)關(guān)人員出入”，其實(shí)之前的一稿是堅持必須在D級背景下的，但是第三稿已經(jīng)做了讓步了，國家已經(jīng)在非常大的與國外法規做對接了，不過(guò)我覺(jué)得在現在的國情下可謂是大膽的推進(jìn)，也是對國內企業(yè)極大的信任。按其要求，可在非潔凈環(huán)境背景中設置隔離系統，但是必須限制無(wú)關(guān)人員出入，同時(shí)該房間至少也要滿(mǎn)足干凈整潔，不堆積無(wú)關(guān)物品等要求。個(gè)人還是建議至少置于D級背景下比較靠譜，第一、是出于對隔離器HEPA使用壽命的考慮；第二、在潔凈背景下控制也是保證隔離器滅菌效果穩定（某些滅菌劑需室內溫濕度穩定）；第三、使用潔凈環(huán)境，是控制和降低樣品等進(jìn)入隔離器之前其外表面生物負荷的長(cháng)期有效措施。
2、 活菌操作區
在活菌操作區內會(huì )進(jìn)行很多操作，如檢驗菌種的復蘇/傳代/保藏等、污染菌的分離/鑒定/保藏等、還有就是很重要的微生物的方法學(xué)驗證。這些實(shí)驗當中都會(huì )接觸和處理一些活體的微生物，處理不當會(huì )造成實(shí)驗室的環(huán)境污染，可能還會(huì )影響其他實(shí)驗結果。該區域應包含菌種的存放區域、培養區域和滅菌清潔區域，不得將污染活體的物品帶出該區域。
活菌操作區應該設置門(mén)禁或嚴格控制人員進(jìn)出，這個(gè)在之前的菌種那篇文章中有相關(guān)BSL-2級實(shí)驗室的介紹，同時(shí)在操作活菌的區域一般里面會(huì )配備生物安全柜，安全柜級別按操作的菌種等級進(jìn)行配備，該操作室相對于普通房間應為負壓，順便提一句題外話(huà)，該區域生物安全柜的定期驗證應由衛生局認可的有資質(zhì)的第三方公司進(jìn)行確認。
在該區域中有冰箱、培養箱和滅菌器等散熱設備，應考慮設置空間或設置物理隔斷；另外因滅活菌種會(huì )散發(fā)異味，故應考慮房間的通風(fēng)設施；在外部的普通實(shí)驗室可考慮安裝紫外燈定期對外部環(huán)境進(jìn)行消毒，避免傳遞過(guò)程可能帶出活菌操作室的微生物帶來(lái)的影響，這就和醫院的輸液室定期使用紫外燈消毒差不多。
3、 其他功能區
在一些微生物實(shí)驗室內還會(huì )配有樣品貯存區、準備區、培養室等，但很多現實(shí)情況是功能區無(wú)法區分的很明顯，所以在同一區域可以使用5S等管理的手法進(jìn)行功能區內設備物品的定置定位，雖然無(wú)法在空間上分隔功能區，但是在視覺(jué)上可以有效指導人員進(jìn)行功能區分。
準備區一般進(jìn)行洗消、配制和滅菌等工作，必須配備純水系統、滅菌器及部分柜子等硬件，同時(shí)應在區域上區分待清潔、已清潔和已滅菌的區域，避免實(shí)驗中使用到不符合要求的物品。
檢品的培養區域一般和觀(guān)察區域是在一起的，建議觀(guān)察區應找一處明亮處，并設置暗背景和白背景各一，便于液體培養物檢驗結果的觀(guān)察；同時(shí)在我們實(shí)驗室也配備普通放大鏡、機械的菌落計數器（即下部有明亮背景可使平板底部透光，上端有燈加觀(guān)察的正常倍數的鏡片及放大鏡片）及自動(dòng)菌落計數器（置于觀(guān)察室內，室內有下光源和側光源，并有高像素相機，軟件連接電腦觀(guān)察）便于平板樣品的觀(guān)察。
這里特別提一下的是，培養基等所謂“干凈”的物品絕對不能與帶菌種的物品貯存于同一冰箱，也建議不置于同一區域，一定要避免交叉污染的可能！
二、各功能區的環(huán)境監測及日�？刂�
1、 環(huán)境監測
潔凈區的環(huán)境監測手法和頻次指導原則上已經(jīng)寫(xiě)的很明確了，挑一些重點(diǎn)的和現在大家都有些爭議的點(diǎn)進(jìn)行探討。
1） 監測平板
浮游菌、沉降菌及表面微生物使用何種培養基進(jìn)行監測，是否一定要TSA測一下然后SDA再測一下，如果僅使用TSA，那培養溫度和時(shí)間如何規定，這個(gè)是很多人在培訓潔凈區監測時(shí)候會(huì )向老師提的問(wèn)題。這里我就匯總一下各公司的做法，僅供大家參考，其實(shí)這個(gè)問(wèn)題我也問(wèn)了不下五次，沒(méi)有標準答案，只是需符合各企業(yè)的環(huán)境監測要求即可。
關(guān)于是否使用SDA的問(wèn)題。企業(yè)一，每次TSA和SDA并行，全部房間都做，但是兩種平板上未檢出過(guò)真菌；企業(yè)二，經(jīng)風(fēng)險評估，因在TSA上真菌也可生長(cháng)，且在日常監測中幾乎捕捉不到真菌，故在日常監測時(shí)，對于關(guān)鍵房間2種培養基都使用，在非關(guān)鍵房間僅使用TSA，但若在檢測過(guò)程中，發(fā)現僅使用TSA檢測的非關(guān)鍵房間生長(cháng)真菌，則應在本次檢測中使用SDA再次進(jìn)行監測，并在后續的監測中使用2種培養基進(jìn)行觀(guān)察；企業(yè)三，經(jīng)風(fēng)險評估，因在TSA上真菌也可生長(cháng)，且在日常監測中幾乎捕捉不到真菌，故僅在梅雨季節的三個(gè)月的環(huán)境監測中，加入SDA進(jìn)行霉菌的控制，但若在檢測過(guò)程中，發(fā)現僅使用TSA檢測的期間有潔凈室生長(cháng)真菌，則應在本次檢測中使用SDA再次進(jìn)行監測，并在后續的監測中使用2種培養基進(jìn)行觀(guān)察。三個(gè)方案都有企業(yè)使用，當然前提是企業(yè)真菌無(wú)檢出或極少，若一直有真菌檢出那肯定不可能舍棄SDA，同時(shí)肯定要徹查潔凈室，如霉菌污染是相當棘手的問(wèn)題。個(gè)人覺(jué)得使用風(fēng)險評估的手段對于選擇培養基還是很好的方法，若不使用SDA還是應有一段時(shí)間的實(shí)驗數據作為依據，不太建議依理論行事，因為每個(gè)企業(yè)所處的地理環(huán)境、生產(chǎn)的藥品及潔凈區內的情況不一樣，所以還是得依據實(shí)際情況判斷。
關(guān)于僅使用TSA的培養溫度和時(shí)間的問(wèn)題。若既使用SDA，又使用TSA，問(wèn)題很好解決，TSA在30~35℃培養3d。但不使用SDA僅使用TSA，大家就有爭議了。企業(yè)一，僅使用TSA，先置于30~35℃培養3d，再置于20~25℃培養2d；企業(yè)二，僅使用TSA，先置于20~25℃培養3d，再置于30~35℃培養2d；企業(yè)三，僅使用TSA，置于30~35℃培養5d。很多企業(yè)使用的是企業(yè)一和企業(yè)三的做法，因為本來(lái)TSA就可以支持真菌生長(cháng)，而且TSA本來(lái)就是培養需氧菌總數的培養基，個(gè)人也覺(jué)得這2種做法均可，也相對合適。
這里還要提一句的是，如果之前使用2種培養基，在SDA捕捉到的真菌無(wú)法在TSA上按企業(yè)規定的培養條件和時(shí)間生長(cháng)的話(huà)，且確認該類(lèi)菌是潔凈室環(huán)境監測過(guò)程中時(shí)常會(huì )出現的菌，不應取消SDA的監測。
另外，做動(dòng)態(tài)沉降菌使用的平板，如果要放置4h，請實(shí)驗室進(jìn)行驗證，如在超凈臺層流下放置幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)，再進(jìn)行適用性檢查確認其是否符合規定，一般是無(wú)法放置4h的，培養基會(huì )失水，某些菌的回收率就無(wú)法達標。
2） 表面微生物監測方法
表面微生物的監測一般是在對設備和人員或者是不規則表面進(jìn)行微生物監測的情況下使用，其監測的方法有接觸碟法和擦拭法。不知道有沒(méi)有實(shí)驗室去挑戰過(guò)這2種方法的回收率，反正我們實(shí)驗室挑戰過(guò)，結果嘛。。。真的是慘不忍睹，而且真的沒(méi)有規律可言。
這是非常無(wú)奈但是也是現實(shí)問(wèn)題，我們企業(yè)位于上海，我咨詢(xún)過(guò)知名外企，他們給我的回答是這不可能做到50-200%的回收率，如果檢查官員問(wèn)這個(gè)問(wèn)題的話(huà)，他們的回答是請您給我一個(gè)方法教我做這2個(gè)方法的回收率。對于這樣的回答我只能說(shuō)太牛X了！我怎么就沒(méi)想到呢！不過(guò)打死我我都想不到還能這樣回答問(wèn)題的。。。但是我們企業(yè)就是個(gè)不認死理的主，在我們質(zhì)量總監堅信科學(xué)理念的堅強領(lǐng)導下，我們實(shí)驗室就接下了這活，最后結果真的就是沒(méi)法分析沒(méi)法看啊，最后找了PDA的資料去做總結，也是苦了我們的驗證主管。不過(guò)這也是所謂的用事實(shí)說(shuō)話(huà)了，總比沒(méi)有數據只看書(shū)的強！
這里想提的就是，如果使用表面微生物監測方法的話(huà)，一定要記得，你取到的微生物真的只是冰山一角！而且那回收率還不是穩定的！接觸碟的有效接觸面積哪來(lái)的25 cm2，只有23.6 cm2好不好！所以又少了吧！如果你采樣的數值已經(jīng)接近不合格限，你自己考慮考慮吧！
3）警戒限和糾偏限的制定
有的企業(yè)使用50%和80%的合格限制定，有的企業(yè)整理歷史數據再使用統計學(xué)的方法進(jìn)行制定，這里沒(méi)有統一的標準，但是當你制定好企業(yè)的警戒限或糾偏限時(shí)，后續的監測永遠不會(huì )踩限或頻頻踩限，那制定的限度值就應當重新考慮。同時(shí)應定期整理歷史數據，適時(shí)的調整警戒限及糾偏限，讓其更趨于實(shí)際，起到幫助企業(yè)控制環(huán)境的效果。
A級（超凈臺或隔離器）的所有踩限的問(wèn)題均必須要進(jìn)行調查，同時(shí)應注意雖未踩限但其過(guò)程中的趨勢變化。
2、 日�？刂�
實(shí)驗室的日�？刂苹A的我就不羅嗦了，只描述一些比較容易忽略和需要強調的點(diǎn)。
潔凈區和活菌操作區的物品絕對不能混用，一樣的東西配兩套，這錢(qián)不能省，兩個(gè)潔凈室內的物品也不應混用，傳遞過(guò)程中容易引入污染。
實(shí)驗室控制限員非常重要，一般的微生物潔凈室或陽(yáng)性室都不會(huì )太大，更衣時(shí)盡量保持一人更衣，即使2個(gè)人一起進(jìn)入做實(shí)驗，也規定要一人更衣完畢，再允許第二人更衣進(jìn)入；檢查室即實(shí)驗房間的人數越少越好，能一人操作的實(shí)驗絕不兩人操作，如果擔心實(shí)驗中遇到問(wèn)題，一人描述的事件重現性不好，可以安裝攝像頭控制；設備維修或其他人員需進(jìn)入必須得到領(lǐng)導允許，且建議微生物室人陪同進(jìn)入，因為我們每次都會(huì )進(jìn)一個(gè)所謂“外來(lái)人員”我們都要再打掃一遍，真的是風(fēng)險不是潔癖！
現在有很多實(shí)驗室還使用手泡消毒液然后再進(jìn)入，我們實(shí)驗室考慮到女孩子比較多，就引入了含護膚成分的手消毒凝膠，一方面可以有效降低裸手上的微生物量（需進(jìn)行實(shí)驗確認），另一方面因為成分多數為醇類(lèi)殘留較低，同時(shí)也避免了使用裸手浸泡消毒液或噴酒精而對皮膚的傷害（有的甚至脫皮，反而不利于潔凈室顆粒和微生物的控制）。
使用消毒劑對潔凈室或陽(yáng)性室進(jìn)行消毒或熏蒸，盡量選擇氣味適宜的消毒劑，若實(shí)在無(wú)法馬上變更，則應為清潔人員配備相應的口罩，讓其在清潔消毒時(shí)呼吸到正常氣味的空氣，否則肯定影響消毒效果。
應定期對潔凈室及陽(yáng)性室內的設施進(jìn)行檢查，因日常不會(huì )有設備部同事進(jìn)入，所以我們必須有相關(guān)的意識去找出問(wèn)題維護好實(shí)驗室，如硅膠脫落、不銹鋼生銹、紫外燈或照明燈不亮等情況。
微生物實(shí)驗室的實(shí)驗環(huán)境日常都是靠我們微生物實(shí)驗室的人員進(jìn)行整理和維護的，因此把我們的實(shí)驗環(huán)境變得干凈整潔有序并受控，是方便我們日常的實(shí)驗操作，降低實(shí)驗差錯，提高實(shí)驗的準確率的有效途徑。借著(zhù)15版藥典升級的契機，我們可以對我們一直待慣的實(shí)驗室進(jìn)行一次大掃除和大整頓，使其更符合我們的使用要求，更好的為我們服務(wù)。
