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微生物鑒定的主要技術(shù)方法
在報告中，曾靜介紹，微生物鑒定技術(shù)主要有形態(tài)學(xué)觀(guān)察、全自動(dòng)微生物生化鑒定系統和依據細胞物質(zhì)進(jìn)行微生物鑒定技術(shù)等方法。她在報告中對三種方法進(jìn)行了詳細的闡述。
據她介紹：微生物的形態(tài)學(xué)觀(guān)察主要是依據微生物的形態(tài)和生理生化反應等特征來(lái)進(jìn)行微生物的分類(lèi)和鑒定。用微生物的形態(tài)特征來(lái)鑒定微生物是由于微生物的形態(tài)比較單一，容易分辨；用微生物的生理生化反應特征來(lái)鑒定微生物主要是依據微生物細胞壁的組成、微生物發(fā)酵產(chǎn)物和微生物對碳源、氮源等養分的利用。
曾靜同時(shí)提到這種方法相對比較繁瑣、耗時(shí)，因此近年來(lái)被全自動(dòng)微生物生化鑒定系統逐步替代。
全自動(dòng)微生物生化鑒定系統實(shí)際上是將多個(gè)生化反應有效整合、濃縮于商業(yè)化的板卡上，方便實(shí)驗室進(jìn)行微生物的鑒定。全自動(dòng)微生物生化鑒定系統具有以下優(yōu)點(diǎn)：
1.生化反應數量多，商業(yè)化的卡板最多可集合45-46種生化反應；2.實(shí)驗操作標準化，節省大量人工；3.鑒定速度快，一般3-4小時(shí)即可出鑒定結果。基于以上優(yōu)點(diǎn)，目前，全自動(dòng)微生物生化鑒定系統已經(jīng)作為實(shí)驗室中微生物的日常鑒定手段。除此之外，全自動(dòng)微生物生化鑒定系統還具有細菌的MIC值測定和耐藥表型的檢測等作用。
蛋白質(zhì)檢測與DNA檢測
曾靜在介紹依據細胞物質(zhì)進(jìn)行微生物鑒定技術(shù)時(shí)說(shuō)，該技術(shù)主要包括蛋白質(zhì)的檢測和DNA的檢測，是目前微生物鑒定技術(shù)的兩個(gè)發(fā)展方向。依據蛋白質(zhì)檢測的鑒定技術(shù)，具有鑒定速度快的特點(diǎn)，主要檢測儀器有飛行時(shí)間質(zhì)譜�；贒NA檢測的鑒定技術(shù)，對微生物的分型能力很強，該檢測技術(shù)主要有16S rDNA測序技術(shù)、PFGE和全基因組測序技術(shù)等。
·在蛋白質(zhì)檢測方面，曾靜介紹說(shuō)，利用飛行時(shí)間質(zhì)譜進(jìn)行微生物鑒定的原理是通過(guò)質(zhì)譜獲得微生物特征蛋白質(zhì)分子的“指紋圖譜”，然后與大容量的數據庫進(jìn)行對比，最終實(shí)現菌落或者菌株水平上的鑒定。質(zhì)譜鑒定系統的優(yōu)勢主要體現在鑒定速度快，僅需十余秒即可完成。
·在DNA檢測技術(shù)方面，曾靜分別就16S rDNA測序技術(shù)、PFGE和全基因組測序技術(shù)做了詳細的闡述：
1、16S rDNA基因是細菌核糖體DNA的一部分，被稱(chēng)為細菌的“活化石”，該基因進(jìn)化速度十分緩慢，具有生物鐘的特點(diǎn)，已經(jīng)作為細菌系統發(fā)育的目的基因，16S rDNA序列測定是科研領(lǐng)域細菌分類(lèi)和鑒定的金標準。目前，常見(jiàn)的商業(yè)化測序系統有針對細菌16S rDNA中的500bp保守序列進(jìn)行測序、針對真菌的28S rDNA的D2基因區域進(jìn)行測序等。該方法獲得的數據有利于致病菌的溯源分析，但是操作過(guò)程具有一定的復雜度，耗時(shí)較長(cháng)，另外，基因測序儀和測序耗材試劑的價(jià)格較貴，因此不利于在應用層面進(jìn)行推廣。
2、報告中，曾靜對PFGE闡述道，PFGE(脈沖場(chǎng)凝膠電泳)是一種分離大分子DNA的方法。此種方法的原理是將細菌包埋于瓊脂塊中，用適當的內切酶在原位對整個(gè)細胞染色體進(jìn)行酶切，酶切片段在特定的電泳系統中通過(guò)電場(chǎng)方向的不斷交替變換和適合的脈沖時(shí)間等條件作用而得到良好分離的方法。PFGE的分型能力極強，可區分菌株水平的差異，目前被全世界各個(gè)國家普遍使用。通過(guò)PFGE分型可以對細菌性傳染病、食源性致病菌進(jìn)行監測，同時(shí)可以進(jìn)行分子流行病學(xué)的調查，但是操作較為繁瑣，需要較高的實(shí)驗技能方可掌握。
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