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隨著(zhù)化妝品使用越來(lái)越廣泛。已成為人們日常生活中的必需品。開(kāi)展化妝品衛生質(zhì)量監測。是保障人民健康維護消費者的利益，如使用了細菌總數超標的化妝品。會(huì )導致皮膚感染 。因此，化妝品細菌總數測定是便于判明樣品被污染的程度。是對樣品進(jìn)行衛生學(xué)評價(jià)的重要依據 。
實(shí)驗原理
菌落總數是指化妝品檢樣經(jīng)過(guò)處理，并在一定條件下培養后，得到的1g或1ml檢樣中所含細菌菌落的總數。
菌落總數的測定（平板活菌計數法）是根據微生物在固體培養基上所形成的菌落（即由一個(gè)單細胞繁殖而成，且肉眼可見(jiàn)的子細胞群體）的生理及培養特征進(jìn)行的。也就是說(shuō)，一個(gè)菌落即代表一個(gè)單細胞。
測定時(shí)，首先將待測樣品制成均勻的、一系列不同稀釋度的稀釋液，并盡量使樣品中的微生物細胞分散，使之成為單個(gè)細胞狀態(tài)存在（否則1個(gè)菌落就不能代表1個(gè)菌）；再取一定稀釋倍數的一定量稀釋液接種到培養基上，使其均勻分布。菌落由單個(gè)細胞生長(cháng)繁殖而成，因此通過(guò)統計菌落的數目，可計算樣品中的含菌數。
由于所計算出的菌數是培養基上長(cháng)出來(lái)的菌落數，故不包括死菌，因此菌落總數的測定又稱(chēng)為活菌計數。
菌落總數可作為判定食品被污染程度的標志，也可用于觀(guān)察細菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài)，以便在對被檢樣品進(jìn)行衛生學(xué)評價(jià)時(shí)提供依據。
前邊所述的細菌菌落總數實(shí)際上僅為樣品中總細菌數的一部分，其余細菌皆因種種原因未能長(cháng)出。每種細菌都有其一定的生理特性，欲將各種細菌都有培養出來(lái)，就必須創(chuàng )造各種不同的培養條件，包括營(yíng)養、溫度、pH、需氧性等，去滿(mǎn)足各種細菌的要求。在實(shí)際工作中，不可能也不必要培養出所有的細菌，所得結果只是能在肉汁營(yíng)養瓊脂上生長(cháng)的嗜中溫需氧性的菌落總數。
儀器設備
（1）培養箱：（36±1）℃。
（2）恒溫水浴鍋：（46±1）℃。
（3）天平。
（4）滅菌廣口瓶或三角瓶：500ml。
（5）滅菌培養皿：皿底直徑9.0㎝。
（6）滅菌吸管：1.0㎝、10.1㎝。
（7）滅菌小試管。
（8）玻璃珠：直徑5㎜。
（9）均質(zhì)機。
（10）滅菌刀、剪刀、鑷子。
（11）酒精燈。
培養基和試劑
(1) 營(yíng)養瓊脂培養基
成分：
蛋白胨 10g 瓊脂 15～20g
牛肉膏 3g 蒸餾水 1000mL
氯化鈉 5g pH 7.2～7.4
制法：將除瓊脂以外的各成分溶于蒸餾水中，用15%的NaOHt調節pH使之在7.2～7.4。加入瓊脂，于121℃下高壓滅菌15min
(2) 生理鹽水
成分：
NaCl 0.9g 蒸餾水 100ml
制法：一般每種檢樣配制250ml無(wú)菌生理鹽水。稱(chēng)取2.2gNaCl,加入250ml蒸餾水溶解；分裝于2支大試管中，每支9ml;再量取225ml裝于500ml廣口瓶或三角瓶中，并加入適量的玻璃珠；剩余的裝入另1支試管中，包扎后于121℃下高壓滅菌15min。
(3) 75﹪的酒精棉球。
實(shí)驗步驟
1.菌落總數的檢驗程序（圖1）
檢樣
↓
制成幾個(gè)適當倍數的稀釋度
↓
選擇2～3個(gè)適宜的稀釋度，個(gè)取1ml加入滅菌培養皿
↓
每皿內各加入適量的營(yíng)養瓊脂
(36±1)℃↓
菌落計數
↓
報告
圖1 菌落總數的檢驗程序
在無(wú)菌條件下，將25ml(或25g)檢樣剪碎，放入裝有225ml無(wú)菌生理鹽水和適量玻璃珠的500ml廣口瓶或三角瓶?jì)�，�?jīng)充分振搖，形成10-1均勻稀釋液。
用1ml的無(wú)菌吸管吸取10-1稀釋液1ml，注入裝有9ml無(wú)菌生理鹽水的試管內，振搖混合均勻，即為10-2稀釋液。再用此吸管吸取10-1稀釋液各1ml于2個(gè)培養皿內。
另取1ml的無(wú)菌吸管吸取10-2稀釋液1ml，注入裝有 9ml無(wú)菌生理鹽水的試管內，振搖混合均勻，即為10-3稀釋液。再用此吸管吸取10-2稀釋液各1ml于2個(gè)培養皿內。
采用相同的方法吸取10-3稀釋液各1ml于2個(gè)培養皿內。
檢樣在36±1℃下48h后營(yíng)養瓊脂培養基中細菌的菌落數。
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