細菌的常見(jiàn)染色法

革蘭氏染色法

　　革蘭氏染色法是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫師Gram創(chuàng )立。 

　　細菌先經(jīng)堿性染料結晶染色，而經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類(lèi)，前者叫做革蘭氏陽(yáng)性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G—）。為觀(guān)察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復染。陽(yáng)性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數和球菌，以及所有的放線(xiàn)菌和真菌都呈革蘭氏正反應；弧菌，螺旋體和大多數致病性的無(wú)芽胞桿菌都呈現負反應。

　　革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應不一樣�，F在一般認為革蘭氏陽(yáng)性菌體內含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復合物，它與碘和結晶紫的復合物結合很牢，不易脫色，陰性菌復合物結合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應的主要依據。 　　另外，陽(yáng)性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在相同PH條件下進(jìn)行染色，陽(yáng)性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時(shí)的條件要嚴格控制。例如，在強堿的條件下進(jìn)行染色，兩類(lèi)菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應；PH很低時(shí)，則可都呈負反應。此外，兩類(lèi)菌的細胞壁等對結晶紫—碘復合物的通透性也不一致，陽(yáng)性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時(shí)間，脫色方法也應嚴格控制。 　　革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：

　�。保┩科�固定。

　�。玻┎菟徜@結晶紫染1分鐘。

　�。常┳詠�(lái)水沖洗。

　�。矗┘拥庖焊采w涂面染1分鐘。

　�。担┧�洗，用吸水紙吸去水分。

　�。叮┘�95%酒精數滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后水洗，吸去水分。

　�。罚┺�紅梁色液（�。┤�10秒鐘后，自來(lái)水沖洗。干燥，鏡檢。

· 染色的結果:革蘭氏陽(yáng)性菌，呈紫色；革蘭氏陰性菌，呈紅色。

下面是革蘭氏陽(yáng)性桿菌和革蘭氏陰性桿菌：

· 革蘭氏染色過(guò)程中應注意的事項：

1）接種環(huán)接的菌不能太多，防止涂片太厚，不易脫色。

2）干燥（固定）：要在酒精燈的高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，切勿緊靠火焰或加熱時(shí)間過(guò)長(cháng)，防止菌體燒焦變形。

· 固定的目的：

a.殺死微生物，固定細胞結構；

b.保證菌體能更牢固粘附在載玻片上，防止標本被水沖洗掉；

c.改變染料對細胞的通透性，因為死的原生質(zhì)比活的原生質(zhì)易于脫色。

（2）．細菌結構

A、基本結構及功能

①細胞壁：細胞最外層。賦予細胞特定形態(tài)，保護細胞不受高壓和機械壓力的破壞。化學(xué)成分主要由粘肽（共有的）、蛋白質(zhì)、脂類(lèi)等組成。

②細胞膜作為滲透屏障，選擇性滲透細菌體內外物質(zhì)的交換，維持新陳代謝、參與呼吸作用�；瘜W(xué)成分基本相同，由磷脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、碳水化合物組成。

③細胞漿（質(zhì)）：是細胞膜包圍著(zhù)的部分，是細菌的基礎物質(zhì)、內在環(huán)境，是細菌合成蛋白質(zhì)、核酸的場(chǎng)所�；�礎成分是水、蛋白質(zhì)、核酸、脂類(lèi)

④極核：位于細胞漿內，控制著(zhù)細胞新陳代謝、生長(cháng)繁殖、細菌的遺傳變異信息。 

B、特殊結構及功能

①莢膜：某些在細胞壁外包一層粘性物質(zhì)，相對穩定的附于細胞壁外。具有保護、能源供應的作用�；瘜W(xué)組成主要是多糖或多肽類(lèi)。

②鞭毛：菌體內長(cháng)出的細長(cháng)絲狀物細菌的運動(dòng)器官�；瘜W(xué)成分主要是蛋白質(zhì)，少量糖類(lèi)、脂類(lèi)。

③纖毛：比鞭毛更細、短、直、硬，數量更多的毛發(fā)狀細物。 

功能：獲得營(yíng)養。由蛋白質(zhì)亞單位組成。

④芽孢：某些細菌在生活的一定階段，能在體內形成一個(gè)特殊的休眠體。

l 孢子的形成

活菌

核細胞聚集（在惡劣生長(cháng)條件下）

核周?chē)�有一層厚臂形成（孢子�?/span>

細胞分解，孢子釋出

孢子釋出

適宜生長(cháng)條件下，孢子的膜脹破，新細胞形成。

l 殺滅芽孢條件：121℃ 、20分鐘

                   160℃ 、2小時(shí)

判斷滅菌是否徹底，一般以芽孢是否被殺滅作為標準。

附：芽孢染色法

染液的配制：

a．石碳酸品紅溶液：

堿性品紅                 0.3 g

95%體積分數的乙醇       10ml

50g/L酚水溶液            90 ml

將品紅溶解于乙醇中，然后與酚溶液混合

b．堿性美蘭溶液

c．95%乙醇

染色方法：

a．將有芽孢的細菌涂片，干燥后熱固定；

b．加石炭酸品紅溶液，弱火加熱，冒熱氣約5分鐘，冷卻后水洗；

c．用95%的乙醇脫色2分鐘，水洗；

d．用堿性美蘭溶液復染0.5分鐘，水洗；

e．待干，鏡檢。

結果觀(guān)察：芽孢呈紅色，菌體呈藍色。

上一篇：實(shí)驗室玻璃儀器的注意事項

下一篇：微生物挑戰試驗