海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
海博微信公眾號
海博天貓旗艦店
無(wú)菌檢驗是無(wú)菌藥品出廠(chǎng)檢驗項目中關(guān)鍵項目之一，無(wú)菌檢驗方法的應用可全面掌握測定方法，準確檢測方法的有效性，并適用于試驗樣品的檢驗，有利于企業(yè)對藥品的質(zhì)量控制，確保藥品安全。
而檢驗涉及的操作人員、設施、設備、菌種、培養基等因素會(huì )直接影響無(wú)菌檢驗結果的可靠性。系統的、大范圍的對制藥企業(yè)的無(wú)菌檢驗實(shí)驗室進(jìn)行調研，旨在了解制藥企業(yè)無(wú)菌檢驗實(shí)驗室的日常運行情況和當前存在的實(shí)際問(wèn)題，對于促進(jìn)制藥企業(yè)加強質(zhì)量管理、改進(jìn)質(zhì)量檢驗工作、降低被污染產(chǎn)品投放市場(chǎng)的風(fēng)險、確保公眾用藥安全具有十分重要的現實(shí)意義。調研結果對于管理部門(mén)制定相關(guān)法規、起草檢查指南以及檢查員的現場(chǎng)檢查等也具有參考意義。
國家食品藥品監督管理總局食品藥品審核查驗中心于2014年組織上海市食品藥品監督管理局認證審評中心、北京市藥品監督管理局藥品認證管理中心、河北省食品藥品監督管理局藥品審評認證中心、遼寧省藥品認證中心、江蘇省食品藥品監督管理局認證審評中心、安徽省食品藥品審評認證中心、河南省藥品審評認證中心、廣東省食品藥品監督管理局審評認證中心8個(gè)省級藥品認證檢查機構，對轄區內95家無(wú)菌藥品生產(chǎn)企業(yè)的無(wú)菌檢驗實(shí)驗室運行情況進(jìn)行調研。調研的牽頭單位為上海市食品藥品監督管理局認證審評中心，調研內容涉及人員和培訓、培養基的管理、菌種的管理、實(shí)驗室的布局和運行、主要設備、文件、實(shí)驗操作等7個(gè)方面，全面了解企業(yè)無(wú)菌檢查用實(shí)驗室的實(shí)際工作情況和運行現狀。
1、調研基本情況
北京、河北、遼寧、上海、江蘇、河南省(市）認證中心按照企業(yè)的生產(chǎn)規模各選取10家企業(yè)；安徽省認證中心對省內26家無(wú)菌藥品生產(chǎn)企業(yè)全部進(jìn)行了調研；廣東省認證中心是通過(guò)隨機抽取的方式從廣州、深圳、珠海三市的藥品生產(chǎn)企業(yè)數據庫中抽取9家參研企業(yè)。95家無(wú)菌藥品生產(chǎn)企業(yè)的企業(yè)性質(zhì)包括國有、民營(yíng)、外商獨資、合資、股份制等，覆蓋生物制品、疫苗、粉針劑、凍干粉針劑、小容量注射劑、大容量注射劑、無(wú)菌原料藥、滴眼劑。調研采取現場(chǎng)檢查配合書(shū)面匯總的形式，各調研參加單位抽調富有經(jīng)驗的藥品GMP檢查員1〜3名和微生物學(xué)專(zhuān)家組成調研小組，對每家企業(yè)調研1〜2天�，F場(chǎng)檢查采用事先通知或不通知的方式進(jìn)行，采集的數據真實(shí)可信，調研結果能夠反映我國無(wú)菌藥品生產(chǎn)企業(yè)無(wú)菌檢驗實(shí)驗室日常運行的現狀。
2結果和討論
2.1人員和培訓
95家參研企業(yè)中各企業(yè)的實(shí)驗室人員總數占其所有直接從事藥品生產(chǎn)人員總數（含生產(chǎn)、質(zhì)保、物流等非銷(xiāo)售崗位）的比例為0.3%〜21%，從事無(wú)菌檢驗的人員人數為2〜29人，從事無(wú)菌檢驗工作0.5〜30年。多數從事無(wú)菌檢驗的人員具有大專(zhuān)或本科學(xué)歷，并具備微生物學(xué)或相近專(zhuān)業(yè)的知識背景。
從事無(wú)菌檢驗的人員經(jīng)過(guò)相關(guān)培訓和考核，包括各地藥品檢驗所、藥監部門(mén)、制藥行業(yè)相關(guān)團體組織、公司內部等舉行的培訓，培訓內容包括微生物檢測技術(shù)、無(wú)菌檢查法、菌種管理及操作、培養基配制及滅菌、藥典、藥品GMP等內容。檢驗人員、實(shí)驗室管理人員和質(zhì)量保證人員對實(shí)驗數據審批分工明確，職責清楚。
調研結果也顯示，個(gè)別企業(yè)的質(zhì)量保證人員對于無(wú)菌檢測知識掌握不全面，實(shí)驗管理人員對于偏差調查分析的能力不夠；部分企業(yè)個(gè)別上崗時(shí)間較短的操作人員檢驗操作不規范；部分企業(yè)對培訓效果未進(jìn)行考核。
2.2培養基的管理
有93家參研企業(yè)無(wú)菌檢查用培養基為硫乙醇酸鹽流體培養基和改良馬丁培養基等，符合《中國藥典》要求。有2家外資企業(yè)用硫乙醇酸鹽流體培養基檢查細菌，根據《美國藥典》或《歐洲藥典》的要求用大豆酪蛋白消化肉湯或肉湯營(yíng)養培養液(TSB)檢查霉菌，與我國藥典要求不同，但與《中國藥典》規定方法進(jìn)行過(guò)比較試驗。
95家參研企業(yè)中，有3家企業(yè)對培養基供應商進(jìn)行了質(zhì)量評估，5家企業(yè)對培養基供應商的書(shū)面材料進(jìn)行審查或核對培養基檢驗報告。絕大多數參研企業(yè)未對培養基供應商進(jìn)行質(zhì)量評估。
培養基配制和滅菌能按培養基使用說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行并有記錄，但只有部分企業(yè)對培養基的滅菌程序進(jìn)行了驗證；近半數企業(yè)在培養基配制滅菌后未按藥典要求測pH值；10%的企業(yè)每次配制培養基都做靈敏度檢查，半數企業(yè)只對脫水培養基做靈敏度檢查，部分企業(yè)不做培養基靈敏度檢查；有1家企業(yè)未按規定條件貯藏培養基；部分企業(yè)配制滅菌后的培養基外包裝的標記信息不全面。
2.3菌種的管理
參研企業(yè)無(wú)菌檢驗使用的標準菌株包括金黃色葡萄球菌、大腸埃希桿菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、白色念珠菌、銅綠假單胞菌、生胞梭菌、大腸桿菌、乙型溶血性鏈球菌，符合《中國藥典》要求[1—2],標準菌株主要來(lái)源于認可的國內或國外菌種保藏機構如中國食品藥品檢定研究院、中國醫學(xué)細菌菌種保藏管理中心、ATCC等。
90%的企業(yè)工作菌株的傳代次數和貯存方法、條件（斜面、甘油管等）基本符合要求。每支菌種均標注有名稱(chēng)、標準號、接種日期、傳代數。有10%的企業(yè)在菌種傳代過(guò)程中做菌落表面形態(tài)特征觀(guān)察及革蘭氏染色鏡檢觀(guān)察，有1家企業(yè)每年用細菌鑒定儀（vitek)對標準菌株進(jìn)行鑒定。
40%的企業(yè)不能提供菌種的來(lái)源證明；90%的企業(yè)在菌株定期轉種、傳代過(guò)程中未對純度、特性等關(guān)鍵指標進(jìn)行確認，也未制定相關(guān)程序；20%的企業(yè)菌種管理內容不夠全面，無(wú)法追溯；1家企業(yè)從標準菌株傳代至工作菌株的操作過(guò)程未嚴格按照相應標準操作規程（SOP)進(jìn)行操作和記錄，代次劃分不正確；1家生物制品企業(yè)無(wú)標準菌株。
2.4實(shí)驗室的布局和運行
實(shí)驗室包括有檢驗（無(wú)菌檢查）用潔凈室或隔離系統及陽(yáng)性菌實(shí)驗室、培養區、培養基及實(shí)驗用具準備（包括滅菌）區、樣品接收和儲存區、菌種貯存區。
無(wú)菌檢驗實(shí)驗室和陽(yáng)性菌實(shí)驗室的設置一般采用3種方式：
（1)無(wú)菌檢驗實(shí)驗室、微生物限度檢查室和陽(yáng)性菌實(shí)驗室三室分開(kāi)，各自采用專(zhuān)用的空氣凈化系統和獨立的人、物流，均在萬(wàn)級背景下的超凈工作臺或生物安全柜中進(jìn)行相關(guān)操作；
（2)無(wú)菌檢驗實(shí)驗室、微生物限度檢查室和陽(yáng)性對照室三室分開(kāi)，共用一套空氣凈化系統、人流，陽(yáng)性菌實(shí)驗室空氣直排，均在萬(wàn)級背景下的超凈臺下或生物安全柜進(jìn)行相關(guān)操作；
（3)無(wú)菌檢驗實(shí)驗室與微生物限度檢查室二室分開(kāi)，共用一套空氣凈化系統，在1萬(wàn)級背景下的超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行相關(guān)操作，陽(yáng)性菌實(shí)驗室為在非潔凈區內單獨實(shí)驗室的生物安全柜內進(jìn)行。
1家企業(yè)無(wú)菌檢驗試驗室單獨用一套隔離器系統，4家企業(yè)的無(wú)菌檢驗試驗室為B級背景下局部百級，1家企業(yè)無(wú)菌檢驗試驗室為10萬(wàn)級背景下局部百級。50%的企業(yè)無(wú)菌檢查用潔凈區空調凈化系統連續開(kāi)啟。企業(yè)參照生產(chǎn)用潔凈區的要求完成了有關(guān)的驗證和確認工作，無(wú)菌檢查用潔凈區符合藥品GMP的要求。
90%的企業(yè)無(wú)菌檢驗室的人流、物流通道能夠嚴格區分，并制定相應控制程序。無(wú)菌檢驗人員經(jīng)二次更衣后進(jìn)入無(wú)菌檢驗實(shí)驗室，試驗樣品均經(jīng)消毒劑擦拭或紫外燈照射或兩者并用后進(jìn)人無(wú)菌檢查實(shí)驗室。
少數企業(yè)存在無(wú)菌實(shí)驗室面積偏小、設施不能完全滿(mǎn)足要求、設備擺放不合理等現象。
2.5主要設備
參研企業(yè)無(wú)菌培養基的配制、培養等設施與檢驗工作量基本相匹配；均對培養基、器具滅菌設備、培養箱相關(guān)的計量器具按規定進(jìn)行了校準并有標識。80%的企業(yè)對培養基的滅菌設備進(jìn)行確認和驗證，其中，有10%的企業(yè)對滅菌設備進(jìn)行驗證時(shí)只使用了生物指示劑，但沒(méi)有連續監測溫度。80%的培養基滅菌設備有自動(dòng)溫度控制探頭但無(wú)自動(dòng)記錄溫度的裝置。80%的企業(yè)培養箱（室）有溫度自動(dòng)控制裝置，近半數企業(yè)進(jìn)行培養箱溫度分布均勻性驗證；90%的企業(yè)培養溫度每天定時(shí)觀(guān)測和記錄，10%的企業(yè)培養箱（室）有連續監測溫度的裝置。
2.6文件
80%的企業(yè)能按無(wú)菌產(chǎn)品品種的無(wú)菌檢驗方法進(jìn)行驗證，并根據驗證結果制定無(wú)菌檢驗的操作規程。80%的企業(yè)無(wú)菌檢驗記錄內容能包含關(guān)鍵的實(shí)驗細節，數據基本完整。10%的企業(yè)無(wú)菌檢驗記錄不及時(shí)，無(wú)菌檢驗原始記錄未包括偏差記錄、設備編號、檢驗規程的編號、培養基信息、陽(yáng)性菌的配制等。
文件記錄以及實(shí)驗室數據對于無(wú)菌檢驗實(shí)驗室的質(zhì)量管理具有重要的意義。通過(guò)對實(shí)驗室原始數據及實(shí)驗規程、方法和設備（包括其維護和校準）以及方法驗證數據的考察，可以對實(shí)驗室運作的全面情況、實(shí)驗人員的技術(shù)能力和全面質(zhì)量控制的過(guò)程有一個(gè)整體的評價(jià)。
2.7實(shí)驗操作
參研企業(yè)均制定了進(jìn)人無(wú)菌檢查實(shí)驗室的人員的更衣程序；物料、樣品經(jīng)擦拭消毒后進(jìn)人傳遞窗，并在傳遞窗內經(jīng)紫外消毒后傳人無(wú)菌室；無(wú)菌檢驗的樣品量符合藥典的要求；部分企業(yè)建立了無(wú)菌檢查試驗超標結果的調查處理標準操作規程，對無(wú)菌檢驗結果若出現陽(yáng)性后所進(jìn)行的相關(guān)調查、復試的依據、產(chǎn)品的無(wú)菌性評價(jià)以及成品的放行等均進(jìn)行了規定。
個(gè)別企業(yè)上崗時(shí)間較短的操作人員，檢驗操作存在不規范之處；1家企業(yè)未按品種進(jìn)行無(wú)菌檢驗方法學(xué)驗證；1家企業(yè)雖進(jìn)行了產(chǎn)品無(wú)菌檢驗方法學(xué)驗證，但驗證中的樣品取樣量不正確；3家企業(yè)未按藥典要求做陽(yáng)性菌對照試驗和陰性對照試驗；約10%的企業(yè)只做陰性對照而不做陽(yáng)性對照試驗，這多為生物制品生產(chǎn)企業(yè)；約20%的企業(yè)對超標結果未進(jìn)行系統的分析和記錄；個(gè)別企業(yè)出現陽(yáng)性結果后未做調查分析就進(jìn)行復試；近半數企業(yè)空氣凈化系統不連續開(kāi)啟，也未對自?xún)魰r(shí)間進(jìn)行確認；個(gè)別企業(yè)在進(jìn)行無(wú)菌試驗時(shí)未對試驗環(huán)境進(jìn)行動(dòng)態(tài)監測，20%的企業(yè)只對超凈工作臺或生物安全柜進(jìn)行動(dòng)態(tài)監測而不對1萬(wàn)級背景區進(jìn)行動(dòng)態(tài)監測。
3、調研結論及建議
參研企業(yè)無(wú)菌檢查實(shí)驗室的布局與設計充分考慮到了防止微生物污染和生物安全的要求，檢驗用試驗菌來(lái)自認可的國內或國外菌種保藏機構的標準菌株，從事無(wú)菌檢查的人員基本具備微生物學(xué)或相近的專(zhuān)業(yè)知識教育背景，能按照藥品GMP及相關(guān)法規的要求對無(wú)菌藥品進(jìn)行無(wú)菌檢驗，產(chǎn)品的無(wú)菌檢驗記錄包含了關(guān)鍵的實(shí)驗細節。部分被調研企業(yè)在人員的專(zhuān)業(yè)知識及操作技能、菌種及培養基的管理、設施設備驗證、對無(wú)菌檢驗環(huán)境監測等方面存在缺陷，個(gè)別企業(yè)在菌種傳代、無(wú)菌試驗復試、陽(yáng)性對照試驗等方面還存在問(wèn)題。綜上，提出建議如下：
(1) 由于部分參研企業(yè)對員工的培訓還流于形式，培訓效果不理想，質(zhì)量保證人員對無(wú)菌檢驗知識掌握不全面，個(gè)別管理人員對于偏差調查分析的能力不足。因此，藥品生產(chǎn)企業(yè)應組織實(shí)驗室全體人員進(jìn)行理論學(xué)習，明確無(wú)菌實(shí)驗室工作原理、環(huán)境要求，設置嚴格的工作流程，明確分工并強化責任技師有效的合作配合意識。同時(shí)，應制定不同崗位人員的有針對性的培訓計劃并組織實(shí)施和考核，考核不合格者不得上崗。檢查機構在對藥品生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行檢查時(shí)，除了核對人員的資質(zhì)外，應注重對無(wú)菌檢查人員的專(zhuān)業(yè)知識、實(shí)際操作技能及分析和解決問(wèn)題的能力進(jìn)行檢查。
(2) 針對部分企業(yè)在菌種及培養基采購、管理及使用過(guò)程中存在不規范之處，大部分企業(yè)不知道在菌株定期轉種、傳代過(guò)程中對其純度、特性等關(guān)鍵指標進(jìn)行確認的必要性，個(gè)別企業(yè)甚至出現菌種傳代代次劃分不正確的情況，建議制定藥品無(wú)菌檢驗、菌種管理、培養基管理的指導原則，指導制藥企業(yè)加強和規范對菌種、培養基的管理，使無(wú)菌檢驗更規范。應強化監管力度，盡快實(shí)行培養基的準人制度。對生產(chǎn)培養基的廠(chǎng)家進(jìn)行認證，尤其對生產(chǎn)無(wú)菌試驗培養基的廠(chǎng)家實(shí)行生產(chǎn)許可證制度，避免市場(chǎng)混亂無(wú)序。
(3) 部分企業(yè)在出現無(wú)菌試驗結果超標時(shí)，未嚴格按《中國藥典》和藥品GMP的要求進(jìn)行必要的調查和分析就進(jìn)行復試，存在風(fēng)險。多數企業(yè)在發(fā)現無(wú)菌產(chǎn)品被污染時(shí)，缺乏對污染菌進(jìn)行鑒別的條件和經(jīng)驗。建議企業(yè)配置必要的設施和人員，對無(wú)菌檢驗檢出的污染菌及檢驗環(huán)境中的檢出菌進(jìn)行
分析和記錄，不斷積累數據，了解環(huán)境中微生物的分布狀況。
(4) 不同地區制藥企業(yè)無(wú)菌檢驗實(shí)驗室、微生物限度檢查實(shí)驗室、陽(yáng)性菌實(shí)驗室的設置和布局存在較大差異，且對檢測環(huán)境監測的頻次、取樣時(shí)間、取樣點(diǎn)布置等方面各企業(yè)都不盡相同。多數企業(yè)只動(dòng)態(tài)檢測沉降菌，對浮游菌、操作人員手指、工作服表面、工作臺面不做監測。企業(yè)應根據藥品GMP(2010年修訂）及《中國藥典》（2010年版)的要求，改進(jìn)無(wú)菌實(shí)驗室布局，制定適合的環(huán)境監測計劃。針對多數生物制品企業(yè)在無(wú)菌檢驗時(shí)沒(méi)有進(jìn)行陽(yáng)性對照實(shí)驗的情況，企業(yè)應根據《中國藥典》（2010年版)的要求設置陽(yáng)性對照實(shí)驗室并按要求進(jìn)行陽(yáng)性對照實(shí)驗。建議在對生物制品企業(yè)進(jìn)行監督檢查時(shí)，將陽(yáng)性對照實(shí)驗作為重點(diǎn)檢查的內容。
上一篇：制作工作菌株的流程圖
