致瀉性大腸埃希氏菌分離、鑒定

分離

增菌后的EC增菌液分別劃線(xiàn)接種麥康凱或伊紅美藍瓊脂平板

36℃±1℃培養18h-24h

麥康凱：無(wú)色至粉紅色，光滑、濕潤、突出、圓形、邊緣整齊

伊紅美藍瓊脂：紫紅色具黑心，有或無(wú)金屬光澤，光滑、濕潤、圓形、邊緣整齊

初步生化

從選擇性平板上挑取5-10個(gè)菌落分別接種TSI、pH7.2尿素瓊脂和營(yíng)養瓊脂小斜面各一管， 36℃±1℃培養18h-24h

TSI斜面產(chǎn)酸或不產(chǎn)酸，底層產(chǎn)酸，硫化氫陰性和尿素陰性的菌株，挑取營(yíng)養瓊脂斜面上生長(cháng)的菌苔進(jìn)行生化試驗、血清學(xué)分型

生化鑒定

氧化酶陰性

靛基質(zhì)+、甲基紅+、V-P-

腸侵襲性大腸桿菌

賴(lài)氨酸脫羧酶-

動(dòng)力試驗-（O124動(dòng)力陽(yáng)性或陰性）

血清學(xué)鑒定

假定試驗：挑取經(jīng)生化試驗證實(shí)為大腸埃希菌的瓊脂培養物，用致病性大腸埃希氏菌、侵襲性大腸埃希氏菌和產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌多價(jià)O 血清和出血性大腸埃希氏菌 O157 血清做玻片凝集試驗。當與某一種多價(jià) O 血清凝集時(shí)，再與該多價(jià)血清所包含的單價(jià)O血清做試驗。如與某一單價(jià) O 血清呈現強凝集反應，即為假定試驗陽(yáng)性

證實(shí)試驗：制備 O 抗原懸液，稀釋至Mac Farland3 號比濁管相當的濃度。原效價(jià)為 1：160～1：320 的 O 血清，用 0.5%鹽水稀釋至 1：40。稀釋血清與抗原懸液在 10 mm×75 mm 試管內等量混合，做單管凝集試驗�；靹蚝蠓庞�50℃水浴箱內，經(jīng) 16 h 后觀(guān)察結果。如出現凝集，可證實(shí)為該 O 抗原 。

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