微生物與氧關(guān)系的檢測

一、實(shí)驗目的和內容
目的：學(xué)會(huì )檢測微生物與氧關(guān)系的方法，了解微生物與氧的關(guān)系。
內容：通過(guò)調整轉速和瓶裝量檢測微生物生長(cháng)與氧氣的關(guān)系。
二、實(shí)驗材料和用具
大腸桿菌斜面菌種、牛肉膏蛋白胨培養基。
吸量管、三角瓶、恒溫振蕩器、721分光光度計、比色杯等。
三、操作步驟
(一)LB培養基的制備
1．配制牛肉膏蛋白胨培養基。
2．分裝   取4個(gè)300mL三角瓶，每瓶裝入50 mL培養基，編號為1、2、3、4；另取4個(gè)500mL三角瓶，每瓶分別裝入50mL、l00mL、150mL和200mL培養基，編號為5、6、7、8。再取一個(gè)100mL三角瓶，裝入20mL培養基，剩余的培養基裝入到兩個(gè)500mL三角瓶中，所有三角瓶均用8層紗布和線(xiàn)繩包扎。
3．滅菌   將上述分裝的培養基于121C濕熱滅菌30min，冷卻后備用。
(二)供試菌種的制備
l．菌種活化   將冰箱中儲藏的大腸桿菌斜面菌種轉接至牛肉膏蛋白胨斜面培養基上，37℃培養18~20h備用。
2．種子制備   取上述活化的大腸桿菌一環(huán)接人盛有20mL牛肉膏蛋白胨培養基的100mL三角瓶中，37℃，200r/min搖床培養16～18h作為供試種子。
(三)不同轉速對大腸桿菌生長(cháng)的影響
取1~4號三角瓶，每瓶接入lmL上述大腸桿菌種子，1號靜置于溫箱中，2號置75r/min搖床，3號置于150r/min搖床，4號置于225r/min搖床，在37℃下培養12~16h后取出，搖勻，經(jīng)適當稀釋后，測定每個(gè)瓶中的OD值(λ=600nm)，并同時(shí)以原培養基不接種作對照測定。記錄結果于表17-1中。
(四)不同瓶裝量對大腸桿菌生長(cháng)的影響
取上述5~8號三角瓶，按1%的接種量接人上述大腸桿菌種子，37C,200r/min培養12~16h后一并取出，用721分光光度計測定OD值(λ=600m)，如密度太大可作適當稀釋后再測OD值，記錄實(shí)驗結果于表17-2中。
四、注意事項
1．接種前要將種子充分搖勻，接種時(shí)要保證接種量一致。嚴格無(wú)菌操作，以免污染。
2．測定OD值時(shí)要搖勻后再取培養液。若經(jīng)稀釋后測定，則各瓶培養物的稀釋倍數要一致。
五、實(shí)驗報告
1．將測定結果列于表17-1和表17-2中：
表17-1  不同轉數對大腸桿菌生長(cháng)量的影響
表17-2  不同瓶裝量對大腸桿菌生長(cháng)量的影響
2．繪制曲線(xiàn)分別以轉速或瓶裝量為橫坐標，以OD值為縱坐標繪制大腸桿菌生長(cháng)與氧關(guān)系的曲線(xiàn)。
3．試對以上曲線(xiàn)進(jìn)行分析。
六、問(wèn)題和思考
1．根據微生物與氧的關(guān)系，可將微生物分為哪幾大類(lèi)？
2．專(zhuān)性厭氧微生物為什么在有氧的條件下不能生長(cháng)？
3．試設計一實(shí)驗，如何測定酵母菌或放紅菌及霉菌與氧的關(guān)系。
   
   

 

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