蠟樣芽孢桿菌的確證試驗

形態(tài)

  挑取純培養的單個(gè)菌落，作革蘭氏染色鏡檢。蠟樣芽胞桿菌為革蘭氏陽(yáng)性芽胞大桿菌，大小為（1～1.3）μm×（3～5）μm，芽胞呈橢圓形位于菌體中央或偏端，不膨大于菌體，菌體兩端較平整，多呈短鏈或長(cháng)鏈狀排列。 

生化鑒定

  挑取純培養的單個(gè)菌落，進(jìn)行酪蛋白分解試驗、動(dòng)力試驗、V-P試驗、硝酸鹽還原試驗、糖發(fā)酵試驗、溶菌酶耐性試驗。

根狀生長(cháng)試驗

  挑取單個(gè)可疑菌落劃線(xiàn)接種于營(yíng)養瓊脂平板上，30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h。蕈狀芽胞桿菌形成根狀生長(cháng)的特征。多數蠟樣芽胞桿菌菌株形成粗糙的似毛玻璃狀或融蠟狀的菌落。

溶血試驗

  挑取純培養的單個(gè)可疑菌落接種于TSSB瓊脂平板上，30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h。蠟樣芽胞桿菌菌落為淺灰色，不透明，似白色毛玻璃狀，有草綠色溶血環(huán)或完全溶血環(huán)。蘇云金芽胞桿菌和蕈狀芽胞桿菌呈現弱的溶血現象，而多數炭疽芽胞桿菌為不溶血，巨大芽胞桿菌為不溶血。

蛋白質(zhì)毒素結晶試驗

  取經(jīng)30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h并于室溫放置3 d～4 d的營(yíng)養瓊脂培養物少許于載玻片上，滴加蒸餾水混勻并涂成薄膜。經(jīng)自然干燥，微火固定后，加甲醇作用30 s后傾去，再通過(guò)火焰干燥，于載玻片上滴滿(mǎn)0.5％堿性復紅，放火焰上加熱（微見(jiàn)蒸氣，勿使染液沸騰)持續1 min～2 min，移去火焰，再更換染色液再次加溫染色30 s，傾去染液用潔凈自來(lái)水徹底清洗、晾干后鏡檢。

  觀(guān)察有無(wú)游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結晶體。如發(fā)現游離芽胞形成的不豐富，應將培養物置室溫2 d～3 d再行檢查。放置3d～4d以上的蘇云金芽胞桿菌培養物有大量的結晶體，但是只有在芽胞裂解通過(guò)上述染色方法才能見(jiàn)到。然而，除非見(jiàn)到芽胞，否則培養物應在室溫繼續放置幾天以重新檢查毒素晶體。其它芽胞桿菌不產(chǎn)生蛋白質(zhì)毒素晶體。

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