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操作步驟
樣品處理:
冷凍樣品應在45℃以下不超過(guò)15 min或在2℃～8℃不超過(guò)18 h解凍。若不能及時(shí)檢驗，應放于-15℃左右保存；
非冷凍而易腐的樣品應盡可能及時(shí)檢驗。若不能及時(shí)檢驗，應置于2℃～8℃冰箱保存，在24 h內檢驗。
樣品制備
以無(wú)菌操作取樣品25 g（mL），加入PBS 225 mL，用旋轉刀片式均質(zhì)器以8000 r/min～10000 r/min均質(zhì)1 min～2 min，或拍擊式均質(zhì)器拍擊2 min。如無(wú)均質(zhì)器，則將樣品放入無(wú)菌乳缽中磨碎，然后稱(chēng)取25 g（mL）置合適的容器中，加225 mL PBS，充分振蕩混勻。制成1:10的樣品勻液。
增菌
取1：10的樣品勻液10 mL（液體樣品可以選擇原液），加入90 mL胰酪胨大豆多粘菌素肉湯中，于30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h。
分離
取胰酪胨大豆多粘菌素增菌液劃線(xiàn)接種于MYP瓊脂平板上。于30 ℃±1 ℃培養24 h～48 h。觀(guān)察平板上生長(cháng)的菌落。在MYP瓊脂平板上，典型菌落為灰白色至微粉紅色，周?chē)邪咨恋奂t色沉淀環(huán)。
純培養
從每個(gè)平板選取至少5個(gè)典型或可疑菌落，劃線(xiàn)接種于營(yíng)養瓊脂平板做純培養，30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h，進(jìn)行確證實(shí)驗。營(yíng)養瓊脂平板上，典型菌落在為灰白色，偶有黃綠色，不透明，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，邊緣常呈擴展狀，直徑為4 mm～10 mm；
樣品的稀釋
吸取1：10的樣品勻液1 mL加到裝有9 mL PBS的稀釋管中，充分混勻制成1：100的樣品勻液。據對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成十倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1mL無(wú)菌吸管或吸頭。
平板計數
選擇2～3個(gè)適宜的連續稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個(gè)稀釋度分別吸取0.1mL接種到MYP瓊脂平板上，每稀釋度接種兩個(gè)MYP瓊脂平板。用無(wú)菌L棒涂布整個(gè)平板，注意不要觸及平板邊緣。使用前，如MYP瓊脂平板表面有水珠，可放在25℃ ～ 50℃的培養箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。
涂布后，將平板置于30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h后（原標準為36 ℃±1 ℃培養12 h～20 h） ，選取具有15個(gè)～150個(gè)典型或可疑蠟樣芽胞桿菌菌落的平板，進(jìn)行計數。并計算同一稀釋度兩個(gè)平板的平均菌落數。如果菌落不典型，可繼續培養18 h～24 h再計數。
計數后，從每個(gè)平板選取至少5個(gè)已計數的典型或可疑菌落，如果一個(gè)平板上少于5個(gè)典型或可疑菌落，則取所有典型或可疑菌落，分別劃線(xiàn)接種于營(yíng)養瓊脂平板， 30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h，進(jìn)行確證實(shí)驗。
根據確證實(shí)驗確定為蠟樣芽胞桿菌的菌落數，按比例計算出該平板上蠟樣芽胞桿菌菌落數，然后計算同一稀釋度兩個(gè)平板的平均蠟樣芽胞桿菌數，再乘其稀釋倍數，再乘以10，即得每g（mL）樣品中蠟樣芽胞桿菌數并作出報告。
