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培養基對于做微生物的來(lái)說(shuō)就好比是天文學(xué)家觀(guān)察宇宙天體的哈勃望遠鏡一樣，通過(guò)哈勃望遠鏡你可以看到黑洞的盤(pán)狀構造，也可能發(fā)現太陽(yáng)系外的其他行星，就像我們的培養基，讓我們人類(lèi)能發(fā)現那些小小的菌種并觀(guān)察它們的形態(tài)，所以培養基的質(zhì)量幾乎成就了我們實(shí)驗成功的一半，它對于我們微生物檢驗的意義絕不容小覷！
1、 培養基配方梳理
根據自己企業(yè)需使用的培養基整理其配方，最終篩選出的培養基必須與2015版藥典規定的培養基配方一致，值得一提的是如硫乙醇酸鹽流體培養基中的葡萄糖，在中國藥典寫(xiě)5.0g，如果后續篩選國外品牌的培養基，其配方上的葡萄糖可能寫(xiě)5.5g，USP上硫乙醇酸鹽流體培養基上的葡萄糖寫(xiě)的是5.0g/5.5g，如果一眼看去，可能會(huì )直接剔除該國外品牌的培養基，其實(shí)并非，中國藥典寫(xiě)的5.0g的葡萄糖是指無(wú)水葡萄糖，國外品牌配方中的5.5g是指一水葡萄糖，其實(shí)是可以使用的。
所以對于配方的梳理相當重要，讓我們在第一步的時(shí)候不至于走錯，否則如果配方不對僅核對名稱(chēng)，那最后買(mǎi)單的可能真的是實(shí)驗室自己了。很多人喜歡拿著(zhù)藥典直接核對，自己梳理的好處是印象會(huì )更加深刻，所有培養基均整理成一個(gè)表格，便于以后查找和管理。當然每個(gè)物料對于微生物生長(cháng)的作用，我覺(jué)得有興趣的同學(xué)可以了解一下，這對這次藥典為什么培養基會(huì )變化會(huì )有更深入的理解。以下舉例TSB
2、 培養基供應商的篩選
這里指的培養基包括培養基干粉及成品培養基，干粉指的是按藥典配方生產(chǎn)的培養基干粉，直接溶解滅菌即可使用，成品培養基是指用按藥典配方生產(chǎn)的培養基干粉制備出的預灌裝的平皿及液體培養基，即配制好的培養基可直接使用。
對于品牌的篩選每個(gè)實(shí)驗室仁者見(jiàn)仁智者見(jiàn)智，都有一套自己的評判標準，如成本或到貨周期的考量，但是適用性檢查的標準只有一套，那就是藥典明確規定的培養基的適用性檢查方法。之前有個(gè)國內大型企業(yè)的實(shí)驗室主管問(wèn)我們使用哪家的干粉，她說(shuō)她們實(shí)驗室一共就7種培養基，但是涉及到的廠(chǎng)家卻有三家，比如培養基1號、2號、3號使用廠(chǎng)家A的，培養基4號、5號是廠(chǎng)家B的，培養基6號、7號是廠(chǎng)家C的，這樣一來(lái)就真的不好管理，因為你有那么多廠(chǎng)家并不是我們所謂的備選供應商的概念，他是指培養基1號就一個(gè)供應商就是廠(chǎng)家A如果A斷貨或質(zhì)量有問(wèn)題就不能選用廠(chǎng)家B或C的；還有一個(gè)她現在面臨的棘手問(wèn)題是，廠(chǎng)家A培養基干粉瓶上的建議滅菌溫度是115℃、20min，廠(chǎng)家B培養基干粉瓶上的建議滅菌溫度是121℃、15min，這樣如果配制這2個(gè)不同廠(chǎng)家的培養基還不能同一批一起滅菌，因為滅菌溫度時(shí)間都不一樣，那講到這里大家又會(huì )發(fā)現一個(gè)問(wèn)題，那就是如果滅菌溫度時(shí)間不一樣，那使用的滅菌器驗證時(shí)候的滅菌條件又會(huì )增加一個(gè)，包括空載/滿(mǎn)載熱分布、滿(mǎn)載熱穿透生物指示劑挑戰那一大堆的事。。。。。。聽(tīng)完以后我真的是為她著(zhù)急��！實(shí)驗室資源就在此時(shí)被白白浪費，不說(shuō)水電吧，一支生物指示劑那就要小一百了，還是三次滿(mǎn)載挑戰！統一的培養基供應商統一的滅菌條件是最便于管理的，相信現在這樣的企業(yè)應該越來(lái)越少了，那正好趁這次15版改版的契機，好好篩選一下我們的培養基供應商！
最好挑選國內或國外大型的培養基干粉生產(chǎn)廠(chǎng)家，這樣的廠(chǎng)家的資質(zhì)審計相對會(huì )比較方便資料也齊全，另外我建議至少篩選出2家廠(chǎng)家，這2家廠(chǎng)家的產(chǎn)品最好是包含了實(shí)驗室需要的所有培養基干粉品種，其中1家是首選廠(chǎng)家，另1家是備選。選擇過(guò)程中務(wù)必結合后續希望使用的成品培養基的情況，因為大家知道現在成品培養基有的是干粉培養基生產(chǎn)廠(chǎng)家直接生產(chǎn)的，也有的是僅進(jìn)行成品培養基預灌裝的廠(chǎng)家，我個(gè)人的理念是，干粉選擇什么廠(chǎng)家，最好對應的成品培養基的干粉原料也是這個(gè)廠(chǎng)家，這樣能夠最大限度的保證實(shí)驗數據的穩定。
培養基比較有名的廠(chǎng)家做微生物的基本都耳熟能詳，找供應商上門(mén)先了解一下大概的情況，同時(shí)和供應商交流一下后續審計的內容，因為篩選合格的培養基供應商還是需要實(shí)驗數據說(shuō)話(huà)的，供應商吹的多天花亂墜也沒(méi)有實(shí)驗數據來(lái)的有說(shuō)服力！
3、 培養基供應商的審計
1）資質(zhì)審計
資質(zhì)審計審什么？我們QC比較關(guān)心的內容基本包含以下一些內容，生產(chǎn)證書(shū)、生產(chǎn)工藝、配方、出廠(chǎng)標準、CoA、效期證明、價(jià)格、到貨周期、外包裝耐過(guò)氧化氫或其他滅菌劑滅菌證明（一般指在隔離器內經(jīng)其滅菌劑外表面滅菌后使用的成品培養基）、輻照廠(chǎng)家輻照劑量、如國外供應商則應有進(jìn)口批文還有國內授權代理書(shū)等，可參照各企業(yè)QA的供應商審計中的資質(zhì)審計進(jìn)行。理論上，在資質(zhì)審計完成后，才能進(jìn)行適用性審計，但是如果對這家供應商非常有信心，兩方面的審計也可以同步進(jìn)行。
2）適用性審計
適用性審計基本上就是對培養基進(jìn)行藥典規定的適用性檢查實(shí)驗，但是對于商品化的東西我們還是需要加入一些其他的檢查項目，我們實(shí)驗室的檢查項目分四個(gè)：外觀(guān)檢查、pH檢查、無(wú)菌性檢查、靈敏度檢查。
干粉我們這里是選取每個(gè)品種的其中一批進(jìn)行檢查，因為原本就計劃干粉和成品培養基的干粉原料是一個(gè)品牌，成品培養基的每個(gè)品種我們均進(jìn)行三批次的檢查，且每批次均包含首次試驗及末次試驗，首次試驗即收到樣品后直接進(jìn)行適用性檢查，合格后按要求貯存到規定效期時(shí)再進(jìn)行末次試驗，首次試驗和末次試驗的檢查項目是完全一致的，確認其在規定貯存條件的有效期內適用性檢查仍符合實(shí)驗要求，也有的企業(yè)是在效期過(guò)后一周內進(jìn)行，那更加具有挑戰性，其實(shí)這個(gè)看不同企業(yè)需求，雖然有的成品培養基是6個(gè)月，但是實(shí)際使用當中不會(huì )使用到那么長(cháng)時(shí)間，那在近效期的時(shí)候進(jìn)行末次試驗無(wú)可厚非，但是基本上廠(chǎng)家效期驗證肯定是做到效期之后的就如同我們藥品一樣，所以在效期過(guò)后的一周內進(jìn)行末次試驗對于該培養基的考察更有意義，當然若末次試驗不合格可能面臨與供應商溝通的問(wèn)題，大部分供應商是認賬的，但也不排除一些比較計較的說(shuō)你們是在效期過(guò)后試驗，所以試驗結果我們不認。
適用性審計中的各個(gè)檢查項目，在這里我也大致的說(shuō)一下，外觀(guān)檢查項和pH檢查項是我們自己加入的檢查，外觀(guān)檢查項的話(huà)比如外包裝是否完整、培養基的顏色是否正常等，pH檢查項在干粉配制成液體培養基或者是成品培養基的確認時(shí)就很有幫助，比如我們就遇到過(guò)成品培養基剛來(lái)是合格的，但是貯存到近效期其pH就跌出下限了（特別注意SDA）。在這兩個(gè)基礎檢查項均合格后，才進(jìn)行后續無(wú)菌性檢查和靈敏度檢查，這兩項就是完全按照藥典規定來(lái)進(jìn)行的，特別提醒的是回收率的對照品應使用中檢所對照培養基。四項檢查均合格則判其適用性審計合格。
以下是我們實(shí)驗進(jìn)行培養基干粉及成品培養基的部分列表，因涉及到供應商所以把其名稱(chēng)、貨號、批號和價(jià)格隱去。
在上表中可以發(fā)現有些公司的成品培養基還是有這樣那樣的問(wèn)題，當然廠(chǎng)家也解釋說(shuō)因為其產(chǎn)品為輻照產(chǎn)品，我們使用的是中檢所的對照培養基未經(jīng)輻照，所以回收率會(huì )不合格，但是最終我們還是要符合中國藥典的標準的，所以我們沒(méi)有讓步。還要就是若實(shí)驗做出來(lái)結果不符合要求應先確認實(shí)驗室的實(shí)驗結果，我們這里確認不合格的實(shí)驗次數起碼是三次，確認結果后再和供應商進(jìn)行溝通，后續應進(jìn)行供應商實(shí)驗室和我們實(shí)驗室的對比實(shí)驗，最終確定產(chǎn)品是否有問(wèn)題。
4、 培養基的包裝
這個(gè)單獨列一條進(jìn)行討論是針對自配及商購的成品培養基而言，其包裝對于日常使用、貯存有著(zhù)很大的意義，不知道大家在用別的廠(chǎng)家買(mǎi)來(lái)的預灌裝的培養基有沒(méi)有細心觀(guān)察過(guò)其包裝，以下我就預制平皿及液體培養基大致分析一下現狀。
1）預制平皿
預制平皿的商購包裝我看到過(guò)三種，基本都是三層包裝，一種是平皿放置的習慣為5+5就是橫著(zhù)放，袋子手感比較薄的，但是優(yōu)勢是該袋子可降解，且因為有一定透氣性，平皿內部不易產(chǎn)生水滴。第二種是最里面2層是呼吸袋，最外面一層是聚乙烯材質(zhì)的塑料袋。第三種是最里面一層是聚乙烯材質(zhì)，外面2層是呼吸袋，后面2種均是豎直放置10塊平皿現在用的比較多。
不管材質(zhì)如何，一方面我們要考慮平皿外包裝對于內置平皿的貯存無(wú)菌保證、水分的流失以及使用時(shí)候拆包的方便性，另一個(gè)很重要的是對于今后放置于隔離器內經(jīng)外表面滅菌后，該包裝對隔離器滅菌劑的穿透性，這個(gè)的話(huà)首先需要廠(chǎng)家提供的驗證證明，如防過(guò)氧化氫穿透的驗證證明，同時(shí)在后續討論的隔離器的驗證中也要進(jìn)行檢測，畢竟每個(gè)企業(yè)的隔離器內滅菌的濃度和時(shí)間均不同。
若自配預制平皿，有很多公司還是臨用現配的，基本其有效期為7天（按藥典要求），但我這人比較懶，希望能多用一段時(shí)間，也便于管理，所以進(jìn)行了100天的貯存效期的驗證，制備好預制平皿進(jìn)行預培養，預培養后進(jìn)行平皿挑選，合格的平皿用兩層袋包裝后貯存使用，效期三個(gè)月，用下來(lái)還是比較不錯的。
當然自配和商購的各有利弊，自配的回收率可能高于商購的（基于同一品牌干粉而言），因為商購需要進(jìn)行終端滅菌，終端滅菌方法對某些菌的回收率會(huì )有一定影響，而且一批輻照批次的產(chǎn)品，可能放在各個(gè)位置的均勻度不夠好，會(huì )導致一條10塊的平皿中，5塊是好的另5塊不太好，以上問(wèn)題在國外購買(mǎi)的成品培養基上沒(méi)有發(fā)現，但是國內生產(chǎn)成品培養基的某些廠(chǎng)家確實(shí)會(huì )有上述問(wèn)題，所以輻照效果的考察在國內生產(chǎn)成品培養基的供應商審計的時(shí)候必須更加注意！但是商購的每塊平皿的灌裝量和追溯性比較好（每塊有噴碼批號有效期），包裝的密封性更好。
2）液體培養基
對于液體培養基，現在很多實(shí)驗室用鋁蓋膠塞對輸液瓶進(jìn)行密封軋蓋，該類(lèi)密封性的包裝可以延長(cháng)液體培養基的貯存時(shí)間，但是對于實(shí)驗室自己使用自動(dòng)軋蓋封口機進(jìn)行軋蓋及滅菌的實(shí)驗室而言有兩點(diǎn)隱患。
第一，滅菌安全性問(wèn)題。
滅菌時(shí)溫度升高里面的水部分變?yōu)樗魵�，但因為密封包裝，所以瓶?jì)葔狠^大，在滅菌時(shí)有爆瓶幾率，而且在滅菌后，因為培養基不能一直放置在滅菌器內，內部溫度高會(huì )導致培養基顏色加深，培養基內的成分可能有一定破壞，故一滅菌完成，壓力表歸零，滅菌器腔體達到開(kāi)門(mén)溫度要求后，立即將培養基瓶取出，但是這個(gè)時(shí)候，瓶?jì)扰囵B基的溫度還是相當高的，在取出的時(shí)候勢必對培養基瓶有一定的晃動(dòng)，之前的爆瓶率在這個(gè)時(shí)候還是存在的，這個(gè)也是因為我們有實(shí)際的案例，所以大家一定注意使用安全！
第二，包裝可能引入污染問(wèn)題。
滅菌的溫度一般為121℃、15min，但是軋蓋使用的鋁蓋和膠塞以及軋蓋的環(huán)境可能會(huì )導致鋁蓋及膠塞間有部分微生物在該滅菌溫度時(shí)間無(wú)法全部殺滅，有導致污染的可能，實(shí)際操作過(guò)程中也發(fā)現實(shí)驗室使用的所謂的自動(dòng)封口機對于輸液瓶的封口并不那么嚴密�，F實(shí)環(huán)境是一般實(shí)驗室會(huì )使用國產(chǎn)的鋁蓋、膠塞和輸液瓶，若本身該企業(yè)的產(chǎn)品為輸液瓶，則實(shí)驗室可以借用生產(chǎn)的條件對實(shí)驗室培養基進(jìn)行包裝，那這就最好。但是多數情況下，實(shí)驗室還是需要單獨制備，因為實(shí)驗室鋁蓋、膠塞和輸液瓶使用的量較小，所以很多產(chǎn)品好的廠(chǎng)家是不會(huì )銷(xiāo)售這些產(chǎn)品給QC的，所以現實(shí)情況下QC使用的鋁蓋膠塞和瓶確實(shí)不理想。
那很多人會(huì )問(wèn)，那我后續做無(wú)菌檢查要使用隔離器，我也不可能使用非密封包裝形式的培養基呀，這樣我只能使用商購的成品培養基了嗎？那太貴了！老板也不同意��！好既然這樣我就把我們企業(yè)自己發(fā)明的包裝形式貢獻給各位微生物檢驗的同胞，篩選瓶子用挺多時(shí)間，終于篩選出一個(gè)相對比較滿(mǎn)意的輸液瓶了，輸液瓶是玻璃的，瓶口是旋轉的，瓶蓋的頂部是膠塞，便于無(wú)菌檢查的扎針，滅菌前將該瓶口擰緊后回旋半圈（滅菌時(shí)保持內外壓，減少安全問(wèn)題），然后瓶身外套一層呼吸袋封口，滅菌后隔著(zhù)呼吸袋回擰半圈擰緊瓶蓋，至于回旋的位置因為隔著(zhù)呼吸袋去旋轉很難掌握是否擰緊的位置，所以我也想了個(gè)辦法，滅菌前瓶口擰緊時(shí)，在瓶蓋和瓶身上豎直貼上滅菌指示帶，然后用剪刀橫向剪斷瓶蓋和瓶身的條帶，然后回旋半圈，待滅菌完畢后，回擰至瓶蓋和瓶身的滅菌指示帶呈一直線(xiàn)即擰緊，見(jiàn)下圖。
當然這個(gè)包裝必須能經(jīng)受隔離器內滅菌劑滅菌的考驗，我們進(jìn)入潔凈室就脫去外部呼吸袋的包裝，然后進(jìn)入隔離器就是瓶子，至少經(jīng)我們實(shí)驗室隔離器的驗證，能防止過(guò)氧化氫的穿透，同時(shí)用該包裝貯存硫乙醇也可以保證三個(gè)月的效期（大家可以挑戰更長(cháng)時(shí)間的效期，因為硫乙醇氧化層和厭氧層的比例在該包裝里確實(shí)保持的不錯）。日常管理的話(huà)每次配制只需換瓶蓋的膠塞即可，當然了瓶子和瓶蓋我買(mǎi)的是國外的，膠塞我就買(mǎi)國產(chǎn)的了，成本一定要考慮，該用好的用好的，該省的就要省。當初篩選的壓力和工作量還是很大的，希望還在摸索中的實(shí)驗室不再和我們一樣走彎路，這次就把這個(gè)包裝貢獻出來(lái)，希望對大家有幫助，也希望我們中國藥企的微生物實(shí)驗室能夠在這種細節上多交流，共同進(jìn)步！同時(shí)也感謝一些商購培養基和中檢所實(shí)驗室的培養基包裝對我們的啟發(fā)。
說(shuō)了那么多，最后說(shuō)一下商購液體培養基，這個(gè)我真的是要贊國外的培養基，確實(shí)非常不錯，當然我現在也非常希望國內的液體培養基能夠加把勁，因為國內的優(yōu)勢真的是供貨時(shí)間和價(jià)格，這對于企業(yè)還是具有相當誘惑力的，我們也不希望都被國外所壟斷，但是質(zhì)量真的是最高的一個(gè)門(mén)檻。對于企業(yè)來(lái)說(shuō)，購買(mǎi)商購液體培養基在這次15版藥典升級后絕對是個(gè)使用趨勢，其包裝最重要的無(wú)外乎就是無(wú)菌性、靈敏度、包裝耐隔離器滅菌等。這點(diǎn)國外的液體成品培養基各類(lèi)包裝形式及基本資料都非常齊全，實(shí)驗室可以根據自己的需要選擇相應的包裝形式，供應商肯定在商品介紹時(shí)就會(huì )一并幫助挑選，之后符合審計要求就可以納入合格供應商的目錄使用。
5、 對照培養基
對于中國藥典在2010版引入對照培養基的概念，我個(gè)人是相當贊成的，就像理化試驗使用的標準品一樣，中國很多企業(yè)使用的培養基干粉質(zhì)量參差不齊，導致最終實(shí)驗結果的誤判，這樣的損失真的是企業(yè)所無(wú)法承擔的。
中檢所這次對于新引入的培養基對應對照培養基是相當重視的，現在還在進(jìn)行對照培養基的篩選工作，如果大家實(shí)時(shí)跟進(jìn)中檢所的官網(wǎng)的話(huà)，可以發(fā)現TSA這個(gè)培養基的對照培養基已進(jìn)行更換，其原來(lái)的克數是12g/300ml，現在是11.1g/300ml，當然要進(jìn)行培養基的適用性審計，我們還是需要某些培養基的對照培養基的，所以實(shí)驗室必須盡早做出審計計劃購買(mǎi)對照培養基，一般是通過(guò)省所去中檢所進(jìn)行購買(mǎi)，我們一起希望在2015版生效之前，對照培養基能夠齊全吧！
6、 培養基的管理趨勢
借鑒著(zhù)名外企微生物實(shí)驗室的管理模式，微限、無(wú)菌、環(huán)境檢測的培養基均商購，然后進(jìn)廠(chǎng)檢驗放行后使用，在產(chǎn)品檢驗完成后，再次進(jìn)行結束檢驗，確認在使用過(guò)程中，該批培養基均符合使用要求。
現在實(shí)驗室的培養基管理已經(jīng)慢慢傾向于系統化的管理，很多外企使用商品化的培養基、商品化的定量菌株等，這樣將人員的專(zhuān)注力集中于實(shí)驗本身，其實(shí)這也是種風(fēng)險共擔的管理模式，讓專(zhuān)業(yè)的人去做他專(zhuān)業(yè)的事情，在前端對商購的培養基進(jìn)行嚴格的供應商審計，這樣也省卻了實(shí)驗室若出現OOS結果對自配培養基從配制到滅菌到貯存等在實(shí)驗室發(fā)生的一系列的調查，商購培養基可能只需對貯存、使用等進(jìn)行調查即可。
從成本上考慮，我相信國內的成品培養基生產(chǎn)企業(yè)也會(huì )跟上腳步，這樣對于國內藥企來(lái)說(shuō)，實(shí)驗室自配和商購成品培養基的成本其實(shí)相差并不大，企業(yè)自身的人員管理壓力和成本壓力也會(huì )相應減小。
所以回到之前的話(huà)題，培養基的篩選和供應商審計就顯得格外重要，我們要把困難的事情往前做，這樣我們就會(huì )有更多的精力去解決我們更重要的技術(shù)問(wèn)題。培養基的管理是不斷進(jìn)步的過(guò)程，我們實(shí)驗室碰了不少壁，但是收獲更多，相信大家肯定會(huì )有更多更好的建議，也期待大家的交流和意見(jiàn)！
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