冷凍真空干燥保藏法又稱(chēng)冷凍干燥保藏法,簡(jiǎn)稱(chēng)凍干法。它通常是用保護劑制備擬保藏菌種的細胞懸液或孢子懸液于安瓿(ānbù )管中,再在低溫下快速將含菌樣凍結,并減壓抽真空,使水升華將樣品脫水干燥,形成完全干燥的固體菌塊。并在真空條件下立即融封,造成無(wú)氧真空環(huán)境,最后置于低溫下,使微生物處于休眠狀態(tài),而得以長(cháng)期保藏。常用的保護劑有脫脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物質(zhì)。
由于此法同時(shí)具備低溫、干燥、缺氧的菌種保藏條件,因此保藏期長(cháng),一般達5~15年,存活率高,變異率低,是目前被廣泛采用的一種較理想的保藏方法。
恢復培養冷凍干燥菌種的方法
一、安瓶管開(kāi)封
1.用浸過(guò)75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。
2.用火焰將安瓿管頂端適度加熱。
3.滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開(kāi)裂。
4.用挫刀或鑷子敲下已開(kāi)裂的安瓿管的頂端。
二、菌株恢復培養
1.用無(wú)菌吸管,吸取0.3~0.5ml適宜的液體培養基,滴人安瓿管內,輕輕振蕩,使凍于菌體溶解呈懸浮狀。
2.取0.1~0.2ml菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養基上,剩余的菌液,注入適宜的液體培養基內,然后在建議的溫度下培養。
3.若未能活化,或活化后有疑問(wèn)時(shí),請于收到菌種1個(gè)月內,通知營(yíng)養與食品安全所,聯(lián)系補寄事宜。
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