李斯特菌的鑒定和驗證

（1）李斯特菌能水解七葉甘，除格氏李斯特菌外，其他李斯特菌均不能分解甘露醇產(chǎn)酸。在牛津瓊脂平板上，李斯特菌菌落直徑為2〜3mm，帶有黑褐色或黑色暈輪（七葉苷水解所形成），菌落的中心經(jīng)常是下凹的；在PALCAM瓊脂上，李斯特菌菌落直徑為1.5〜2mm，綠色并帶有黑色的暈輪（或菌落中心為黑色）。

（2）驗證時(shí)，挑取5個(gè)典型的菌落，每個(gè)菌落劃線(xiàn)接種到胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂（TSYEA）上，置于35℃或37℃需氧培養24〜48h,分離平板上的單個(gè)菌落以確保菌株的純度。

（3）檢查TSYEA平板上生長(cháng)的單個(gè)菌落,使用亨利描述的菌落特征進(jìn)行分離。亨利認為李斯特菌在TYS平板上生成細小的、半透明的菌落，菌落呈藍色、藍綠色或藍灰色，菌落表面為細小的顆粒狀,類(lèi)似于粗糙的磨砂玻璃。

 從TSYES平板上挑取一個(gè)單個(gè)的菌落，分別接種于胰蛋白胨大豆酵母浸膏肉湯
TSYEB試管和胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂TSYEA斜面上，25℃培養18〜24h。

（4）①用TSYEB肉湯培養物進(jìn)行菌體運動(dòng)試驗和革蘭氏染色。李斯特菌屬呈翻筋斗運動(dòng)，注意與振蕩培養后非致病性李斯特菌的快速直線(xiàn)運動(dòng)進(jìn)行區別。李斯特菌為小的、革蘭氏陽(yáng)性的、無(wú)孢子的短桿菌。

②用TSYEB斜面上的生長(cháng)物進(jìn)行過(guò)氧化氫酶和氧化酶試驗。李斯特菌過(guò)氧化氫酶試驗陽(yáng)性，氧化酶試驗陰性。

③用TSYEB斜面上的培養物接種下列培養基，進(jìn)行驗證和鑒定試驗：

a. 接種D-葡萄糖、D-水楊苷、L-鼠李糖、D-木糖發(fā)酵肉湯(含有溴甲酚紫；見(jiàn)附
錄1，置35℃或37℃培養7d每天檢查產(chǎn)酸的情況(生化管由紫色變?yōu)辄S色)。

b. 接種硝酸鹽蛋白胨水，檢査硝酸鹽的產(chǎn)生情況。在35℃或37℃培養 5d。

c. 使用金黃色葡萄球菌和馬紅球菌進(jìn)行CAMP試驗。在35℃或37℃培養24h。

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