與脂類(lèi)、磷脂類(lèi)等物質(zhì)的反應

1.三丁酸甘油酯的水解作用

培養基：三丁酸甘油酯瓊脂培養基，是在酵母浸膏瓊脂中加入三丁酸甘油酯制成，pH為7.5。三丁酸甘油酯加入后，會(huì )發(fā)生乳化作用，因此，制作時(shí)最好用電動(dòng)混合器或電動(dòng)攪拌器作為攪拌工具。連續3d蒸汽滅菌,每次30min。培養基可鋪成平板使用，先將酵母浸膏瓊脂培養基鋪成平板，再將熔化的三丁酸甘油酯瓊脂培養基覆蓋在酵母浸膏瓊脂上。也可以使用市售的配制好的培養基。

平板劃線(xiàn)接種，橫穿表面劃線(xiàn)一次，在最佳生長(cháng)溫度培養2〜14d。

結果記錄：三丁酸甘油酯水解使培養基變得透明，并形成一個(gè)清晰環(huán)帶，以亳米為單位記錄下從菌落邊緣到清晰環(huán)帶邊緣的寬度。該反應通常被認為是脂肪酶的典型反應，雖然三丁酸甘油酯不是結構復雜的脂肪，細菌的蛋白水解酶也能將其水解。

2.乳脂、橄欖油、人造奶油的水解作用(脂解作用）

（1）乳脂瓊脂和橄欖油瓊脂培養基：由pH7.8的酵母浸膏瓊脂和5%的乳脂或橄欖油所組成。劇烈搖動(dòng)試管使培養基發(fā)生乳化作用。
  在倒好且干燥的平板表面劃線(xiàn)接種。最佳生長(cháng)溫度培養2~14d。
   試劑：飽和硫酸銅溶液。

結果記錄：用8〜10ml試劑充滿(mǎn)平皿，靜置10〜15min，倒掉試劑，用流水輕輕沖洗平皿約1h以將剩余的硫酸銅清洗干凈。有水解作用發(fā)生的地方會(huì )有藍綠色的環(huán)帶出現，這是由于脂解作用發(fā)生時(shí)，游離脂肪酸與銅離子形成不溶性的銅鹽。

（2）維多利亞藍乳脂瓊脂和維多利亞藍人造奶油瓊脂培養基：人造奶油制成的培養基要比奶油制成的培養基更為穩定。人造奶油的選擇可能會(huì )影響結果的觀(guān)察，因為有些人造奶油是由單一的脂類(lèi)物質(zhì)制成的。

維多利亞藍指示劑可以指示游離脂肪酸的存在。但能抑制某些細菌菌株的生長(cháng)，因此，它不適合從混合菌株中分離具脂解作用的菌株。

結果記錄_：發(fā)生脂解作用時(shí),游離脂肪酸則與堿性維多利亞藍結合生成深藍色的鹽類(lèi)。在微生物的周?chē)�或下方產(chǎn)生深藍色環(huán)帶，則表明發(fā)生了脂解作用。培養基的背景色應為略帶桃色的淡紫色。

3.吐溫化合物的水解

吐溫是脂肪酸的聚氧乙烯山梨聚糖酯。除吐溫外，培養基中還應含有可溶性鈣鹽(通
常為氯化鈣〉；可通過(guò)檢測鈣鹽的沉淀來(lái)檢測釋放出的脂肪酸。培養基中可添加吐溫20(月桂酸酯）、吐溫40〔棕櫚酸酯〉、吐溫60〈硬脂酸酯)或吐溫80（油酸酯）。最為常用的是吐溫80。

在倒好并干燥的吐溫瓊脂平板表面劃線(xiàn)接種或點(diǎn)接種，在最佳生長(cháng)溫度培養1〜7d。
結果記錄：菌落周?chē)�形成了不透明環(huán)帶，是因為形成了游離脂肪酸鈣鹽，這表明菌體為脂肪酸酶陽(yáng)性反應。另外吐溫被水包圍形成很多微團，而脂肪酶是一種在水—酯分界
面作用于不溶于水的酯或脂肪的一種酶。所以吐溫的存在能促進(jìn)脂肪酶和其他酯酶的作用。

4．卵磷脂的水解作用

(1)卵黃瓊脂本培養基由營(yíng)養瓊脂、氯化鈉和蛋黃乳組成，其中氯化鈉的含量為0.9%，蛋黃乳的含量為10%。

在已倒培養基的平板表面劃線(xiàn)接種。在最佳生長(cháng)溫度培養1~4d。
結果記錄：卵磷臘酶作用(例如卵黃培養基卵憐脂的水解)的結果是在微生物生長(cháng)區域的周?chē)�形成不透明的環(huán)帶。以亳米為單位記錄環(huán)帶的寬度。

(2)卵黃肉湯在營(yíng)養肉湯中加入0.9%氯化鈉和10%(體積分數)蛋黃乳。
接種后置于最佳生長(cháng)溫度培養

結果記錄：卵磷脂酶作用使蛋黃肉湯培養基形成濁斑，通常伴隨有黏稠的凝乳形成。

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