細菌莢膜染色

學(xué)習并掌握細菌莢膜染色的原理及方法。

二、原理

細菌的莢膜不易著(zhù)色，但通透性較好，染料可通過(guò)莢膜使菌體著(zhù)色，所以，染色后在有顏色的菌體周?chē)�，有一淺色或無(wú)色的透明圏，即為莢膜。為了更清楚地觀(guān)察莢膜常用負染色法，即用有色的背景來(lái)襯托出沒(méi)有染上顏色的莢膜。

三、材料

1.菌種在阿須貝無(wú)氮培養基上培養2〜3d的圓褐固氮菌或硅酸鹽細菌。

2.儀器及其他顯微鏡、酒精燈、載玻片、石炭酸復紅染液、1%黑素或繪圖墨水、95%酒精、在阿須貝無(wú)氮培養基上培養2~3d的圓褐固氮菌或硅酸鹽細菌。

四、方法與步驟

  （1）在干凈的載玻片中央，滴加無(wú)菌水少許。

（2）挑取培養2〜3d硅酸鹽細菌斜面菌體制成涂片，晾干（不可用火焰烘干〕。

（3）加酒精1滴固定（不可加熱〉，待酒精蒸發(fā)掉為止。

(4）石炭酸復紅染色液染色3〜4min然后水洗，晾干。

（5）用種環(huán)取少許黑素于載玻片—端，另取一塊邊緣光滑的載玻片與黑素接觸并向玻片兩側稍滑動(dòng)幾下使黑素散開(kāi)，再以均勻速度向涂片部位推動(dòng)，通過(guò)涂片部位使之成一均勻而且厚薄適中的薄層，自然干燥。也可用繪圖墨水1滴，滴于涂片部位附近，再用另一玻片的一端接觸墨滴，使之向旁邊散開(kāi)，然后拉過(guò)涂片部位，注意墨滴不可太大。

⑷鏡檢、繪圖。

操作中應注意的問(wèn)題：由于莢膜中含有大量的水分和多糖或多肽類(lèi)物質(zhì)，因而受熱時(shí)容易失水收縮使菌體變形，所以染色時(shí)不要加熱固定。

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