細菌芽孢染色

一、目的

學(xué)習并掌握細菌芽孢染色的方法及原理。

二、原理

   細菌的芽孢具有一層結構構致密的芽孢壁，通透性差、著(zhù)色較難，用普通染色法染色菌體著(zhù)色而芽孢呈現不染色的輪廓，但特殊處理（加熱染色或腐蝕性藥物處理）色素即可，透過(guò)芽孢壁使芽孢著(zhù)色，一經(jīng)著(zhù)色便不易褪色，脫色時(shí)只能脫掉菌體的顏色而保留芽孢的顏色。因此，如再換另一種顏色的染液復染菌體，便會(huì )使菌體和芽孢呈不同顏色的鮮明對照。

三、材料

1.菌種 枯草芽孢桿菌。

2.儀器及其他 顯微鏡，接種環(huán)、酒精燈、載玻片、7.6%的孔雀綠染色液、 0.5%的蕃紅、石炭酸復紅、美藍、吸水紙、枯草芽孢桿菌、水浴鍋或小燒杯與三角架。

四、方法與步驟

   1.孔雀綠蕃紅芽孢染色法

（1）涂片經(jīng)火焰固定，滴定孔雀綠染液于涂片上，加熱至產(chǎn)生蒸汽達3~5min (加熱時(shí)要慢慢來(lái)回移動(dòng)，添加染液勿使涂片干燥)。

(2）水洗后，再用蕃紅染液復染1-2min。

  （3）水洗、干燥、鏡檢、繪圖。芽孢被染上綠色，營(yíng)養體呈紅色。
   2.石炭酸復紅染色法

（1）試管一支.加蒸餾水3〜4滴，取1〜2環(huán)芽抱桿菌于水中，并充分搖蕩制成均勻的懸浮液。

   （2）滴加等量3〜4滴石炭酸復紅液搖勻，水浴煮沸10min以上。

   （3）取上述加熱后的染色菌懸液2〜3環(huán)于載玻片上制成涂片，然后經(jīng)過(guò)干燥、火焰固定、水洗。

   （4）美藍復染3~4min，經(jīng)水洗、干燥后，鏡檢，繪圖。

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