溶血試驗

1.血平板溶血試驗

培養基：營(yíng)養瓊脂，含有0.85%的氯化鈉和5%（體積分數）的去纖維蛋白血或經(jīng)草酸鹽處理過(guò)的血。馬血對鏈球菌很合適，但其他的微生物(例如葡萄球菌)則用其他的動(dòng)物血〈例如羊、兔子、牛)要更好一些。營(yíng)養瓊脂培養基熔化后，冷卻到50℃，無(wú)菌地加入已滅菌的血細胞溶液(每10ml瓊脂加0.5ml)。用手旋轉或翻轉試管使其混合，倒入培養皿中。另外，也可以在培養皿中先加入〔5—10ml〕營(yíng)養瓊脂，凝固后在營(yíng)養瓊脂上再倒人5ml血瓊脂，形成薄層,凝固。

試驗方法：對于葡萄球菌，在平板上劃線(xiàn)接種，以得到單個(gè)菌落；如果是鏈球菌，可以?xún)A倒平板接種，也可以劃線(xiàn)接種。在最佳生長(cháng)溫度培養2d。

結果記錄：如菌落周?chē)�有清晰的環(huán)帶出現，則表明有溶血現象。鏈球菌的β-溶血素作用能產(chǎn)生邊緣清晰的環(huán)帶；α-溶血素作用產(chǎn)生的環(huán)帶呈灰綠色且邊緣很模糊。但要注意，α-溶血素和β-溶血素的特征對于鏈球菌和葡萄球菌完全不同。對于葡萄球菌，則α-溶血素能產(chǎn)生清晰的環(huán)帶，而β-溶血素則產(chǎn)生暗色的模糊環(huán)帶。但是，葡萄球菌中的α-溶血素有時(shí)卻被認為是β-溶血素。因此，為避免混淆，最好是對溶血素的類(lèi)型加以描述，而不僅是統稱(chēng)為溶血素。

2.加強溶血試驗（CAMP）

加強溶血試驗是用于檢測B族鏈球菌中的一些菌株和某些特定菌株產(chǎn)生的細胞外可擴散的多肽（CAMP因子）。多肽與葡萄球菌中的β-溶血素可協(xié)同作用,使羊血瓊脂中兩種菌劃線(xiàn)培養的結合處產(chǎn)生加強的溶血作用。甚至非溶血的B族鏈球菌的CAMP測試也呈陽(yáng)性。后來(lái)該方法被用來(lái)區分李斯特菌的不同菌種。

培養基：羊血(體積分數為5%)瓊脂。在檢測李斯特菌屬時(shí)，由于羊血中常攜帶有李斯特菌屬的抗血清，必須先用鹽水沖冼羊血的紅血球，然后再重新懸浮于滅菌的鹽水中。

試驗方法

（1）鏈球菌檢測將產(chǎn)生β-溶血的金黃色葡萄球菌培養液橫穿羊血瓊脂培養基平板劃一條直線(xiàn)。在直線(xiàn)的一端用待測培養液垂直劃線(xiàn),該線(xiàn)與金黃色葡萄球菌培養液的劃線(xiàn)相距1-2mm，37℃培養18-24h。

（2）李斯特菌的檢測 將產(chǎn)生β-溶血素的金黃色葡萄球菌培養液橫穿沖洗過(guò)的羊血瓊脂培養基平板劃一條直線(xiàn)。用馬紅球菌培養液劃另一條平行線(xiàn)，兩線(xiàn)相距4cm左右_：用待測菌液垂直于金黃色葡萄球菌和馬紅球菌劃線(xiàn),與金黃色葡萄球菌球菌培養液和馬紅球菌培養液的線(xiàn)縣局1-2mm，18-24h。

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