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1.復活菌株
選擇合適的培養基和培養條件(根據生產(chǎn)商說(shuō)明）進(jìn)行復活。凍干菌株的傳代次數不得超過(guò)5代，從菌種保藏中心購買(mǎi)的凍干菌種為第0代。
（1）細菌
用無(wú)菌吸管吸0.5ml 液體培養基加到凍干菌塊上，吹打混勻成懸液，將全部懸液移入含有5ml合適的肉湯培養基中。將管中殘留的幾滴懸液移種到斜面上。在合適的條件下培養，細菌培養溫度通常為25℃或37℃。多數凍干菌株會(huì )在幾天后長(cháng)出，但是少數菌會(huì )表現出延滯期延長(cháng)的現象，需要將正常培養時(shí)間加倍。
（2）噬菌體
首先應準備18h〜24h的宿主細菌培養物，往凍干噬菌體中加1.0ml肉湯（視宿主細菌而定)混勻，吸0.1ml懸液到0.9ml肉湯中，依次系列稀釋。每個(gè)稀釋度的稀釋液一滴接種到預先準備好的平板上，每平板采用3個(gè)〜4個(gè)稀釋度。過(guò)夜培養后可出現噬菌斑。
（3）霉菌和酵母菌
用無(wú)菌吸管吸0.5 ml〜1ml無(wú)菌水到凍干菌塊上，將全部?jì)热菸镆?/span>入裝有5 ml，無(wú)菌水的試管中進(jìn)行復水，2 h（或過(guò)夜）后移種到肉湯或固體瓊脂上，在合適的溫度下培養，真菌培養溫度通常是25℃。少數培養物會(huì )表現出延滯期延長(cháng)的現象,需要將正常培養時(shí)間加倍。
如菌株在推薦的培養基、培養溫度和時(shí)間等適宜的條件下培養不生長(cháng)，須滅菌處理之后方可丟棄。
2.菌種純度檢査和確認
(1)菌落形態(tài)
取復活后的培養物，在相應的鑒別平板或普通非選擇性平板上劃線(xiàn)分離，培養出單菌落，觀(guān)察菌落形態(tài)是否符合，同一平板上的單菌落的大小、形狀、顏色、質(zhì)地、光澤等是否相似；對于出現兩種或以上形態(tài)的菌株，應再分別挑取單菌落劃線(xiàn)或稀釋涂布培養，檢測是否重復出現相同特征。
（2）細胞形態(tài)
對數生長(cháng)期的培養物的革蘭氏染色反應應呈現一致性；細胞形狀、大小、鞭毛、莢膜等特征應相似。
（3）芽孢大小、位置、形狀
形成芽孢的菌種，其芽孢大小、位置、形狀應相似。
（4）生化鑒定
必要時(shí)進(jìn)行生化鑒定等實(shí)驗。
(5)污染處理
如發(fā)現菌種有污染，需要分離挑選目標菌株培養成功后將污染培養物做滅菌處理。
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