誘變育種的的基本程序及操作要點(diǎn)

微生物誘變育種一般按照圖12-1所示工作程序進(jìn)行。

二、誘變育種的操作要點(diǎn)

（一）出發(fā)菌株的選擇

用來(lái)進(jìn)行誘變的菌株稱(chēng)為出發(fā)菌株。誘變育種的目的在于提高微生物代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量、改進(jìn)質(zhì)暈或產(chǎn)生新的代謝產(chǎn)物。因此，選擇出發(fā)菌株對誘變效果尤為重要。
   1.作為出發(fā)菌株疢對誘變劑敏感，變異幅度大。

2．從自然界分離到的野生型菌株，對誘變劑敏感，易發(fā)生正向突變。由自發(fā)突變經(jīng)
篩選得到的菌株也屬于野生型菌株。

3.經(jīng)誘變處理獲得的高產(chǎn)菌株再誘變時(shí)易出現負突變，繼續提高產(chǎn)量較難，不易直接作出發(fā)菌株。

4.選擇易于表現出基因發(fā)生改變的單倍體細胞，酵母菌二倍體細胞很穩定，應該挑選異宗接合的單倍體菌株或用子囊孢子進(jìn)行誘變。

5.選擇單核或細胞核少的細胞，在霉菌的誘變育種中，多采用分生孢子或孢子囊孢
子進(jìn)行誘變處理。

(二）細胞懸液的制備

1.采用生理狀態(tài)一致的單細胞或單孢子進(jìn)行誘變處理，不可能使細胞均勻地接觸誘
變劑，還可以減少分離性表型延遲現象的發(fā)生。因此，誘變處理前的細胞應盡可能達到同步培養和對數生長(cháng)期狀態(tài)。

2． 一般誘變處理真菌孢子或酵母菌營(yíng)養細胞，其細胞懸液濃度應為10⁶個(gè)/ml而細菌營(yíng)養細胞或放線(xiàn)菌孢于濃度為10⁸個(gè)/ml，細胞懸液濃度可用平板計數法和血球計數板法測定。

3.一般情況，使用物理誘變劑處理時(shí)，用生理鹽水配制細胞懸液；而使用化學(xué)誘變劑處理時(shí)，由于pH變化易引起誘變劑性質(zhì)的改變而都使用緩沖液配制細胞懸液。

(三）誘變劑和處理方法的選擇

1.誘變劑的選擇 對誘變劑的要求是使遺傳物質(zhì)改變大，難于產(chǎn)生回復突變，這樣獲得的突變株突變性狀穩定。亞硝基胍(NTG)和甲基磺酸己酯(EMS)等烷化雖能引起高頻度的變異，但它們多是引起堿基對轉換突變，易發(fā)生回變；而能引起染色體大損傷或移碼的紫外線(xiàn)、γ-射線(xiàn)等誘變劑，其有優(yōu)越性能。

2.誘變劑量的選擇 選擇最適誘變劑量，也就是在提高突變率的基礎上，即能擴大變異幅度，又能使變異向正向突變范圍移動(dòng)的劑量。研究方向正向突變多出現在偏低劑量中，形態(tài)變異多發(fā)生在偏高劑量中，而一般形態(tài)變異多趨向于降低產(chǎn)量。
   3.誘變處理方法的選擇

（1）紫外線(xiàn)與光復活的交替處理  能使紫外線(xiàn)誘變作用得到顯著(zhù)增強。多次紫外線(xiàn)照射后，并在每次照射后進(jìn)行-次光復活，突變率將大大提高。

（2）誘變劑的復合處理有一定的協(xié)同效應，復合處理有以下幾種方式：兩種或多種
誘變因子先后使用；同—種誘變劑重復使用；兩種或兩種以上誘變劑的交替使用等。

(四）中間培養

突變基因的出現并不意味著(zhù)突變表型的出現，表型的改變落后于基因型改變的現象，稱(chēng)為表型延遲。其原因是分離性延遲和生理性延遲造成的。為此，必須將誘變處理的菌液進(jìn)行中間培養，即將菌液接入完全液體培養基中培養過(guò)夜。

 （五）突變株的分離

 1.營(yíng)養缺陷性菌株的分離

 （1）淘汰野生型、濃縮缺陷型

 （2）缺陷菌株的檢出

 （3）營(yíng)養缺陷型的鑒定

 2.抗性突變菌株的分離

 （1）抗藥性突變株的分離

 （2）抗代謝結構類(lèi)似物突變菌株的分離

 3.產(chǎn)量性狀突變的分離

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