肥達氏反應

【原理】

系以傷寒沙門(mén)菌H、O，肖氏沙門(mén)菌、希氏沙門(mén)菌H 為抗原，檢測病人血清中相應抗體的定量凝集反應。

【材料】

病人血清、生理鹽水、傷寒沙門(mén)菌“H”及“O”菌液，肖氏沙門(mén)菌、希氏沙門(mén)菌“H”菌液、小試管、32 孔(4×8)有機玻璃板，0.2ml 微量移液器及移液頭。

【方法】

1．取32 孔有機玻璃板一塊。

2. 吸取生理鹽水0.8 毫升置于小試管中，然后加入0.8 毫升1:10 稀釋的病人血清充分混勻，此時(shí)血清稀釋為1:20。

3．取上述稀釋的血清0.8 毫升，分別置0.2 毫升于有機玻璃板每排第一孔內.

4. 吸取0.8 毫升生理鹽水，加于血清釋釋管中，混勻后，此時(shí)血清已被稀釋成1:40。

5. 取1：40 稀釋血清0.8 囊升．分別置0.2 毫升于有機破璃板每排第二孔內，以此類(lèi)推，直至每排第七孔。

6．每排第8 孔不加稀釋血清，加0.2 毫升生理鹽水作為對照。

7. 加傷寒沙門(mén)菌“H”菌液0.2 毫升于第一橫排各孔內(從第8 孔開(kāi)始向前加，下同)；傷寒沙門(mén)菌“O”菌液0.2 毫升于第二橫排各孔內；肖氏沙門(mén)菌 “H”菌液于第三橫排備孔內；希氏沙門(mén)菌“H”菌液于第四橫排各孔內。將有機玻璃板加以震蕩，使菌液與血清充分混勻。置玻璃板于42℃孵箱半小時(shí)后觀(guān)察結果，井記錄凝集效價(jià)。

附錄：

1．SS 瓊脂培養基為分離腸道病原菌的強選擇鑒別培養基。其組成成分包括：基礎培養基、乳糖、枸櫞酸鈉，硫代硫酸鈉、枸櫞酸鐵、中性紅、煌綠和膽鹽，其中基礎培養基提供氮和碳源，乳糖在鑒別腸道致病菌和非致病菌上起重要作用，中性紅為指示劑，它在酸性時(shí)呈紅色，在堿性時(shí)呈淡黃色(PH6.8－8.0，，色調變更紅橙黃)。一般腸道致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨產(chǎn)生堿性物質(zhì)，所以菌落呈淡黃色，大腸桿菌發(fā)酵乳糖時(shí)產(chǎn)生酸類(lèi)，能使指示劑變紅，所以菌落呈紅色，中性紅可為光線(xiàn)破壞，所以應將培養基保存于暗處，其余成分作為選擇性抑制劑或緩沖鹽。其中枸櫞酸鈉和煌綠對大腸桿菌的生長(cháng)，菌體蛋白的合成和糖的利用，都有抑制作用，枸櫞酸鈉對致病菌無(wú)作用，枸櫞酸鐵對大腸桿菌無(wú)抑制作用，但能中和煌綠、中性紅等染料的毒性作用。硫代硫酸鈉能使大腸桿菌的紅色菌落顏色鮮明。膽鹽與構櫞酸鈉合用時(shí)，能加強對大腸桿菌的抑制作用。SS 瓊脂培養基，對大腸桿菌的抑制作用很強，對腸道病原菌無(wú)抑制作用或抑制作用微弱，因此可以增加標本的接種量，從而獲得對腸道病原菌較高的陽(yáng)性分離率。

2. 克氏雙糖培養基，下層為含葡萄糖的半固體培養基，可以觀(guān)察細菌的動(dòng)力和對葡萄糖發(fā)酵的能力，例如大腸桿菌能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，所以下層變黃，且有氣泡存在，同時(shí)有動(dòng)力，細菌沿穿刺線(xiàn)向周?chē)鷶U散生長(cháng)。傷寒沙門(mén)菌則分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，有動(dòng)力。上層為含乳糖及硫酸亞鐵的固體，主要是觀(guān)察細菌對乳糖的發(fā)酵情況及產(chǎn)生H2S 的能力，例如大腸道桿菌能發(fā)酵乳糖，所以上層斜面呈黃色，致病性腸道桿菌如傷寒沙門(mén)菌及痢疾桿菌等不能發(fā)酵乳糖，斜面不變色，大腸桿菌不產(chǎn)生H2S，故斜面無(wú)黑色；肖氏沙門(mén)菌產(chǎn)生H2S 則出現黑色。本培養基以酚紅為指示劑，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紅色。

3. 伊紅美藍(Eosin Methyi Blue，EMB)瓊脂平板為分離腸道病原菌的弱選擇鑒別培養基。大腸桿菌發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，使伊紅與美藍結合成黑色化合物，顯示出紫黑色菌落，周?chē)�有一層白環(huán)，病原菌不發(fā)酵乳糖，菌落透明無(wú)色。

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