病毒動(dòng)物接種法

 病毒動(dòng)物接種法

  實(shí)驗動(dòng)物在病毒學(xué)研究中有四方面用途：①分離鑒定病毒，如乙腦病毒；②連續傳代通過(guò)，以減弱有毒株對人的致病力，如狂犬病病毒；③制備抗血清；④病毒致病機理的研究。

  常用的實(shí)驗動(dòng)物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、綿羊、雞、猴等。在病毒學(xué)研究中，動(dòng)物接種時(shí)為避免動(dòng)物本身可能帶有病毒，多采用實(shí)驗室自己繁殖的動(dòng)物。首先根據研究目的選擇動(dòng)物種類(lèi)，對病毒致病機制的研究，則選擇愈接近人類(lèi)的高等動(dòng)物（例如靈長(cháng)類(lèi)）研究結果愈有價(jià)值；其次要注意動(dòng)物的年齡、性別和接種的途徑等各種因素，一般年幼的動(dòng)物比成年動(dòng)物對病毒的敏感性高。至于接種的途徑應根據病毒的嗜性決定，例如腦炎病毒以腦內注射最敏感。

（一）小白鼠尾靜脈接種

【材料】

1. 動(dòng)物：小白鼠

2. 病毒懸液

3. 碘酒、酒精、二甲苯、無(wú)菌0.25ml 注射器、4 號針頭及小鋁匣

【方法】

1. 將小白鼠固定在小鋁匣內，露出尾部，用碘酒消毒尾部，然后用酒精棉球連

續擦尾部皮膚（必要時(shí)用二甲苯擦）使血管擴張。

2. 尾背和左右兩側三根血管皆為靜脈，可選一根擴張較好的靜脈作接種用。左手拇指捏住尾部的遠端，向下彎45°，右手持注射器，于彎處進(jìn)針靜脈，推液0.1毫升。

注意：推注時(shí)遇阻力且皮下隆起發(fā)白時(shí)，表示針頭不在血管內應拔出重新進(jìn)針；如針頭在血管內，推注時(shí)不感阻力，且可看到血管中血液由于注入液體而后退。接種后逐日觀(guān)察動(dòng)物發(fā)病情況。

（二）小白鼠鼻內接種（錄像）

【材料】

小白鼠、流感病毒鼠肺適應株病毒懸液、無(wú)菌小試管、無(wú)菌毛細管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。

【方法】

1. 首先將沾有乙醚的棉球放入一清潔小玻瓶?jì)�。左手握小瓶，右手抓住小白鼠，將其頭部塞入瓶口，進(jìn)行全身麻醉。注意麻醉深度，不宜太淺或太深，太深時(shí)易遭致麻醉死亡或非特異性吸入性肺炎，太淺則易在滴種時(shí)打噴嚏。

2. 用無(wú)菌毛細吸管吸取病毒懸液少許，連同毛細吸管插在無(wú)菌試管中備用。

3. 用左手將小白鼠握在手掌中，大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其頭部朝前并呈仰臥位置，另一手取事先吸有病毒懸液的吸管，慢慢滴出一點(diǎn)于滴管口而不使其自然掉落，呈懸滴狀。將懸滴靠近動(dòng)物鼻尖，動(dòng)物在呼吸時(shí)自然吸入，一般為0.03～0.05 毫升，不宜過(guò)多。

4. 小白鼠慢慢蘇醒，在飼養盒中逐日開(kāi)始發(fā)病，發(fā)病的癥狀常為毛聳、咳嗽、不食、甚至死亡。解剖尸體可觀(guān)察到肺炎或血性病灶。

（三）小白鼠腦內接種

【材料】

腦炎病毒（小白鼠腦脊髓炎病毒）懸液。腦組織先用無(wú)菌生理鹽水洗去血液，再加10％脫脂奶鹽水研磨成10－1 懸液，然后用3000 轉/分離心沉淀30 分鐘，吸取上清液供接種用。

小白鼠：3 周齡，體重6～8 克。無(wú)菌 0.25 毫升注射器及針頭（4 號）、煮針鍋、碘酊、棉簽。

【方法】

1. 以無(wú)菌0.25 毫升注射器抽取腦炎病毒懸液0.1 毫升，去除注射器內的氣泡。

2. 取出小白鼠，左手將小白鼠固定，固定時(shí)用大拇指和食指捏住小白鼠的頭部，左手手掌輕輕按住小白鼠的體部。

3. 右手以棉簽蘸以碘酒，消毒小白鼠顳部皮毛（不碰到眼）。

4. 右手拿注射器在小白鼠顳部（眼與耳根連線(xiàn)的中點(diǎn)略偏耳朵的方向）刺入，進(jìn)入顱腔，進(jìn)針2～3 毫米，不要插得太深，注射量為0.02～0.03 毫升。

5. 注射完畢，將用過(guò)得注射器放入煮針鍋內煮沸消毒。動(dòng)物一般在3～4 天后開(kāi)始發(fā)病，食欲減退，活動(dòng)遲鈍，毛聳，震顫，慢慢發(fā)展為麻痹，癱瘓而死亡。

本法適用于一些腦炎病毒的分離培養。

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