膿汁或喉拭子分離培養

【材料】

1．標本：膿汁或喉拭子。

2．培養基：血瓊脂平扳、甘露醇發(fā)酵管、菊糖發(fā)酵管。

3．兔血漿、生理鹽水、毛細滴管、吸管、小試管、試管架、革蘭染液、玻片。

【方法】

1．將膿汁或喉拭子作涂片(注意先分離培養，后作涂片，避免污染)，革蘭染色后鏡檢，觀(guān)察細菌形態(tài)、排列及染色性。

2．將膿汁或喉拭子材料接種血瓊脂平板，置37℃培養18~24 小時(shí)。

3．根據菌落特點(diǎn)及涂片檢查結果，作出初步判斷，必要時(shí)再作進(jìn)一步鑒定。

（1）若菌落中等大小、完全溶血、不透明、產(chǎn)生金黃色色素、涂片革蘭染色陽(yáng)性，葡萄狀排列，可能是金黃色葡萄球菌，可進(jìn)一步做血漿凝固酶試驗和甘露醇發(fā)酵試驗，確定其致病力。

（2）若菌落較小、半透明、完全溶血、涂片革蘭染色陽(yáng)性 、大都呈鏈狀排列，為乙型鏈球菌。

（3）若菌落較小、半透明、綠色不完全溶血環(huán)，涂片革蘭染色陽(yáng)性 、呈短鏈狀排列，為甲型鏈球菌或肺炎鏈球菌，需要進(jìn)一步鑒別，可作膽汁溶菌和菊糖發(fā)酵試驗。學(xué)生通過(guò)判別做進(jìn)一步的實(shí)驗（甘露醇發(fā)酵和菊糖發(fā)酵試驗）。將接種后的甘露醇發(fā)酵管和菊糖發(fā)酵管放入37℃孵箱。

附錄：

血瓊脂平板培養基：加熱融化pH7.6 的肉湯瓊脂培養基100 毫升，冷至45℃~50℃時(shí)，以無(wú)菌操作加入脫纖維的兔血或羊血5~10 毫升。搖勻后傾注平板，冷凝后即成。37℃孵譽(yù)24 小時(shí)，無(wú)菌生長(cháng)，即可使用。血瓊脂平板是營(yíng)養培養基，因血液內含多種營(yíng)養物質(zhì)，可促進(jìn)營(yíng)養要求較高的細菌的生長(cháng)。血瓊脂平板也可用來(lái)檢測細菌的溶血性。血液不耐熱，故需待瓊脂稍冷后才能加入。

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