生物因素對細菌的影響

(一) 細菌對抗生素的敏感性測定 (藥敏試驗)

【材料】

金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌18~24 小時(shí)肉湯培養液、瓊脂平板培養基、抗生素紙片(浸沾一定濃度的青、鏈、氯、慶大霉素后，37℃烘干備用)、尖頭鑷子。

【方法】

1． 取瓊脂平板培養基 2 塊，分別于其底部玻璃上注明金黃色葡萄球菌及痢疾桿菌，并用蠟筆將平皿底部劃分四等分，分別注明青、鏈、氯、慶大霉素。

2． 將二菌菌液分別涂于上述二個(gè)培養基平板上。

3． 鑷子經(jīng)火焰滅菌，鑷取各藥物紙片，分別貼于涂有細菌的培養基平板表面相應位置上。

4． 置 37℃中孵育18~24 小時(shí)，觀(guān)察紙片周?chē)�有無(wú)抑菌圈，并比較各抑菌圈的大小，判斷二菌對抗生素的敏感度。

附：紙片法藥敏試驗紙片含藥量和結果解釋?zhuān)?/span>NCCLS 1998 年）

NCCLS：美國臨床實(shí)驗室標準化委員會(huì )

(二) 噬菌體對細菌的作用—特異性裂解試驗 (平板法)

【材料】

大腸桿菌及痢疾桿菌瓊脂斜面培養物、瓊脂平板培養基、痢疾桿菌噬菌體。

【方法】

1． 取瓊脂平板一只并劃分三等，分別標明 1、2、3。

2． 以接種環(huán)將痢疾桿菌分別密涂于 1、3 兩處，2 處涂布大腸桿菌。

3． 用接種環(huán)沾取痢疾桿菌噬菌體加于 1、2 處的中央，另取l 接種環(huán)肉湯放于3 處中央。

4． 將此培養基平板置 37℃孵育12~24 小時(shí)，觀(guān)察噬菌斑出現的位置加以分析。

附錄：

一、單糖發(fā)酵管培養基制備：配制各種單糖成 20％濃度的水溶液，8 磅蒸汽壓力下滅菌15 分鐘。取pH7．6 的蛋白胨水1000 毫升，加入1．6％溴甲酚紫液1 毫升，混合后分裝于內置一支玻璃小倒管的10×100 毫米試管，每管約3－4 毫升，15磅蒸汽壓力下滅菌15 分鐘。取出后各管貼上顏色標簽或在棉塞上染以顏色。在細菌學(xué)中，通常紅色代表葡萄糖、黃色代表乳糖、白色甘露醇、紫色麥牙糖等，最后以無(wú)菌操作加入相應的滅菌糖溶液至每管中，使最終濃度為l％。

二、IMViC試驗所需培養基，試劑

（一）培養基

1． 蛋白胨水：將蛋白胨10 克、氯化鈉5 克溶解于蒸餾水1000 毫升中，調整酸堿度至 pH7.6，15 磅蒸汽壓下滅菌20 分種，若作吲哚試驗者，宜采用多胨，因其中含色氨酸較多。

2． 葡萄糖蛋白胨水：溶解蛋白胨5 克，葡萄糖5 克、磷酸氫二鉀5 克于蒸餾水 1000 毫升中，調整至pH7.2，濾紙過(guò)濾，分裝后，經(jīng)8 磅蒸汽滅菌15 分鐘。

3． 枸櫞酸鹽斜面培養基：溶解磷酸二氫銨0.1 克、硫酸鎂0.02 克、磷酸氫二鉀 0.1 克、枸櫞酸鈉0.2 克、氯化鈉0.5 克于蒸餾水100 毫升中，加入瓊脂2克。加熱溶化之。酸堿度調整至pH6．8，加入指示劑0.5%溴麝香草酚蘭酒精溶液2 毫升。搖勻，脫脂棉過(guò)濾，分裝，15 磅蒸汽壓下滅菌20 分鐘，趁熱制成斜面。制就的枸櫞酸鹽培養基應呈綠色。

(二)試劑

1． 甲基紅試劑：稱(chēng)取甲基紅粉劑 0.1 克,溶于95％酒精300 毫升中，再以蒸餾水稀釋至 500 毫升。

2． 對二甲基氨基苯甲醛(吲哚試劑)：對二甲基氨基苯甲醛5g 與戊醇或丁醇 75 毫升混合，置50～60℃水浴箱中過(guò)夜。次日取出，徐徐滴入濃鹽酸25 毫升，滴加時(shí)隨滴隨搖。配后放暗處備用。

（三）其他生化反應用培養基

1． 醋酸鉛培養基：加熱融化2％肉湯瓊脂200 毫升，加入硫代硫酸鈉0.5克�；旌虾�，15 磅蒸汽壓下滅菌20 分鐘。待冷至45℃，無(wú)菌操作加入經(jīng)間歇滅菌的10％醋酸溶液1 毫升。分裝、直立靜置待凝。

2． 尿素固體培養基：取蛋白胨0.1 克、氯化鈉0.5 克，磷酸二氫鉀0.2克、瓊脂2 克于蒸餾水100 毫升中，加熱溶化。調正pH 至7.4，脫脂棉過(guò)濾。加入0.6％酚紅0.2 毫升，混勻，8 磅蒸汽壓下滅菌15 分鐘。冷至60℃時(shí)，每100 毫升加入l0％無(wú)菌葡萄糖液l 毫升及20％尿素液1 毫升(尿素液應經(jīng)蔡氏濾菌器過(guò)濾除菌)�；旌�，分裝，每管裝2~3 毫升，制成斜面。

(四)常用指示劑的變色范圍。

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