疏水格濾膜（HGMF）MPN值計數法

Sharpe和他的同事在20世紀70年代完善了疏水網(wǎng)格濾膜（HGMF）法，使用這種方法可用最小稀釋度的樣液估計出菌落形成單位cfus（或繁殖體）的數量（見(jiàn)Sharpe和Petekin，1988）。

美國加利福尼亞州圣迭戈QA生命科學(xué)公司是一個(gè)具有5cm×5cm過(guò)濾面積的正方形濾膜。濾膜上的過(guò)濾面積被黑色的疏水格線(xiàn)分割成1600個(gè)小方格。

在培養期間，微生物在方格中生長(cháng)，并被方格的格線(xiàn)圍住。培養后，對有細菌生長(cháng)的方格進(jìn)行計數（如果采用鑒定培養基，對顯示適當的顏色反應的方格進(jìn)行計數）。由于一個(gè)呈陽(yáng)性的小格中不僅僅有一個(gè)菌落形成單位（cfu）或繁殖體[在本文中Sharpe指的是“生長(cháng)單位”，而不是菌落形成單位（cfu）]，所以這并不是“菌落計數”。在HGFM法中，統計一個(gè)系適度有細菌生長(cháng)的方格的數量就可以計算出MPN值�？捎孟铝泄�式進(jìn)行計算MNP值：                  Nlog

式中 N——方格中的總數（如在Iso-Grid®中，N=1600）

   x——呈陽(yáng)性方格的數量

用1600格Iso-Grid®濾膜檢測樣品接種物時(shí)，合理精確的計數范圍是1〜5000。這種方法需要配置的稀釋度比運用平板或濾膜的常規菌落計數所用的稀釋度更低。當濾膜的一半方格呈陽(yáng)性時(shí)，精確度更高。

在美國（見(jiàn)FDA,1992;AOAC,1995）和加拿大，HFMF法在食品微生物分析中是一種認可的官方方法。

Sharpe和Petekin（1988）制定了用HGMF方法進(jìn)行需氧嗜溫菌和大腸菌，沙門(mén)氏菌以及李斯特菌等特定微生物技術(shù)的操做規程。

由于濾膜的方格是整齊排列的，這就可以應用自動(dòng)電子技術(shù)設備對濾膜上呈陽(yáng)性的方格進(jìn)行計數。因為當一半方格呈陽(yáng)性時(shí)，能達到最大的精度，如果人工計數這800個(gè)方格是很費勁的，很可能由于工作人員的疲勞造成計數的錯誤，因此使用自動(dòng)技術(shù)設備不但能節約勞力，還能減少實(shí)驗錯誤。

代替疏水方格濾膜進(jìn)行單倍稀釋的MPN值計數的一種方法是微量滴定板法。如果目標為生物在培養基中的生長(cháng)可能造成顏色變化，培養后就可以使用微量滴定板自動(dòng)進(jìn)行檢測，這個(gè)檢測系統現已投入商業(yè)生產(chǎn)。例如將Qusnti-Tray與Colilert（美國緬因州IDEXX公司）結合使用進(jìn)行總大腸菌群和大腸桿菌的MPN計數。

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