細菌單染色法及口腔微生物的觀(guān)察

 一、實(shí)驗目的和內容
目的：鞏固無(wú)菌操作技術(shù)，掌握細菌的涂片和單染色技術(shù)，了解口腔中的微生物及其觀(guān)察方法。
內容：1.學(xué)習細菌單染色操作技術(shù)。
2. 用單染色法或負染色法觀(guān)察口腔中的微生物。
二、實(shí)驗材料和用具
大腸桿菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylocosccus aureus)的斜面菌種。
呂氏美藍染色液、石炭酸復紅染色液、黑色素液或碳素墨水、香柏油、二甲苯、無(wú)菌水；
顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、吸水紙、無(wú)菌牙簽。
三、操作步驟
(一)單染色法
1．涂片  在潔凈無(wú)脂的載玻片中央滴一小滴無(wú)菌水，用無(wú)菌操作方法從菌種斜面挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成薄膜，涂布面積約1～1.5cm2(圖7—1A、B)。
2．干燥  將涂片于室溫中自然干燥。
3．固定  手扶載片一端，使涂菌的一面向上，將載片通過(guò)微火2～3次。在火上固定時(shí)，用手摸涂片反面，以不燙手為宜。不能將載片在火上烤，否則細菌形態(tài)毀壞(圖7—1C)。
4．染色  將涂片置于水平位置，滴加染色液覆蓋于涂菌處，染色約2min（圖7—1D）
5．水洗  傾去染色液，斜置載片，用自來(lái)水的細水流由載片上端流下，不得直接沖在涂菌處，直洗至從載片上流下的水中無(wú)染色液的顏色為止（圖7—1E）。
6．干燥  自然晾干或用吸水紙輕輕地吸干，注意不要擦掉菌體（圖7—1F）。
7．待標本完全干燥后，先用低倍鏡和高倍鏡觀(guān)察，將典型部位移至視野中央，再用油鏡觀(guān)察。
 (二)口腔微生物的觀(guān)察
1．單染色法
(1)在潔凈無(wú)油膩的載片中央滴一小滴無(wú)菌水，用牙簽取牙垢少許與水滴充分混勻，涂成薄膜。
(2)將涂片于室溫中自然干燥后，按上面單染色法的步驟，進(jìn)行固定、染色、水洗，干燥后鏡檢。
2．負染色法
(1)在潔凈無(wú)油膩的載片的一端滴一小滴無(wú)菌水，用牙簽取牙垢少許與水滴充分混勻，然后加少許黑色素溶液，充分混勻。
(2)另取一載片將其邊緣放在含菌載片的一端，然后推向另一端，則含菌載片上的混合液被推成薄膜。
(3)于室溫中自然干燥。
(4)鏡檢：將光線(xiàn)調亮，先用低倍鏡觀(guān)察，再用高倍鏡觀(guān)察。
四、注意事項
載玻片要潔凈無(wú)脂，否則菌液涂不開(kāi)。涂片時(shí)，滴水不要過(guò)多，挑菌量宜少，菌膜宜薄。
五、實(shí)驗報告
(一)繪圖
1．單染色后觀(guān)察到的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的形態(tài)圖。
2．你所觀(guān)察到的口腔微生物的形態(tài)圖，并注明使用的染色方法，菌體和背景的顏色。
(二)單染色法和負染色法操作要點(diǎn)。
七、問(wèn)題和思考
1．涂片在染色前為什么要先進(jìn)行固定?固定時(shí)應注意什么問(wèn)題?
2．制備染色裝片時(shí)應注意哪些事項，為什么?制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀(guān)察?
3．你知道口腔中通常存在哪些微生物嗎?如何進(jìn)行區分?
  
   

 

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