乳品中活性益生菌選擇性檢測方法的研究

緒言
隨著(zhù)人民生活水平的不斷提高，乳制產(chǎn)品的種類(lèi)日益豐富和多樣化，人體所需的乳酸菌如嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌、干酪乳桿菌、嗜熱乳鏈球菌和保加利亞乳桿菌等通常被作為重要成分加入到各種乳產(chǎn)品當中。乳制品被人體攝入之后，其中包含的活性菌也同時(shí)進(jìn)入到人體內部消化系統，它們能夠幫助平衡腸胃功能健康，抑制對人體有害的各類(lèi)細菌繁殖，能夠顯著(zhù)提高人的身體健康水平。但不是隨便攝入活性菌就能夠起到這種效果，而是需要攝入人體內的活性菌達到一定的數量才能夠有效發(fā)揮作用�？茖W(xué)表明，人體內部活性菌數量要達到 97cfu/ g (m L) 以上才能夠具有明顯效果。實(shí)際上，科學(xué)家在對市場(chǎng)上出售的各種乳制品的研究分析發(fā)現，大多產(chǎn)品中的包含的乳酸菌的活躍度與濃度都嚴重偏低，這一方面是由于生產(chǎn)企業(yè)不負責任所導致，另一方面也與當缺乏一種行之有效的活性乳酸菌檢測工具有關(guān)，因此也不難理解當前市面上為什么存在那么多含超低乳酸菌的乳制品。為有效檢測出乳制品中活性乳酸菌的活力和濃度，市場(chǎng)上和學(xué)術(shù)界都有必要盡快找到一種科學(xué)有效的計算方法。當前，對于嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌等計數方法已有一些研究文獻，但都不是在其純度較低條件下的計數方法，筆者通過(guò)文獻綜述發(fā)現，關(guān)于其他菌類(lèi)計數方面的研究也有學(xué)者嘗試過(guò)，但并沒(méi)有取得突破性進(jìn)展。對此，本文在已有研究文獻的基礎上，總結了一種新的非純度條件下對活性菌計數的方法，能夠有效針對嗜酸乳桿菌、雙歧桿菌、干酪乳桿菌、嗜熱乳鏈球菌和保加利亞乳桿菌進(jìn)行科學(xué)合理的定量分析，為提高軟制品產(chǎn)品品質(zhì)提供可靠度科學(xué)測量工具。
1. 材料與方法
1. 1 供試菌種
嗜熱乳鏈球菌( S t r e p t o c o c c u st h e r m o p h i l u s , S T ) 、保加利亞乳桿菌( L actobacil lus delbr ueckii ssp.bulgaricus,LB) 、嗜酸乳桿菌( Lactobacill u s a c i d o p h i l u s , L A) 、雙歧桿菌( Bif idobacter ia, BB) 、干酪乳桿菌(Lactobacillus casei , LC) 均由華中農業(yè)大學(xué)生物科技學(xué)院微生物實(shí)驗室提供。
1. 2 儀器與設備
厭氧培養箱; 厭氧培養罐; 好氧培養箱。
1. 3 待檢樣品
( 1) 已知菌樣品： 以脫脂乳為培養基,在所需培養條件下分別培養供試的5 種菌,即為已知菌待檢樣品。
( 2) 乳品樣品： 為市售酸乳或乳酸菌發(fā)酵乳飲料, 均含有活性乳酸菌。
2. 結果與分析
2. 1 嗜熱乳鏈球菌、保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌和雙歧桿菌對糖的利用情況

將M R S 瓊脂培養基中的葡萄糖分別以柳醇、纖維二糖、果糖、甘露醇、山梨醇等糖類(lèi)代替, 配制成系列不同的M R S 瓊脂培養基, 并制成平板, 分別接種ST 、LB、LA和BB 菌株, 在所需條件下培養, 觀(guān)測平板上菌落的生長(cháng)情況, 結果如表2 所示。從表2可以看出： 僅LA 可以利用柳醇, 故MRS-柳醇瓊脂培養基可用于L A 的選擇計數。當柳醇質(zhì)量濃度為0. 5% 時(shí), LA 便可形成大小合適的菌落。另外, M R S- 纖維二糖瓊脂、MRS- 甘露醇瓊脂和MRS- 山梨醇瓊脂也可用于LA 的計數。
2. 2 不同培養基平板上ST、LB、LA、BB 和LC 形成的菌落數檢測結果

按照國內外文獻介紹的最先進(jìn)的方法制成十種各不相同的實(shí)驗培養基, 并制成平板,分別接種ST、LB、LA、BB 和LC 的純培養菌株, 觀(guān)察檢測菌落的形成和數量，并分別做好相關(guān)試驗數據記錄。檢測結果表明：
s T-瓊脂和M17-瓊脂適合嗜熱乳鏈球菌的計數; L C- 瓊脂適合干酪乳桿菌的計數;M R S- N N L P 瓊脂適合雙歧桿菌的計數;MRS- pH5. 2 瓊脂適合保加利亞乳桿菌的計數。MRS- 柳醇瓊脂、MRS- 山梨醇瓊
脂、MRS-核糖瓊脂和MRS- 葡萄糖酸鹽瓊脂均可用于LA 和LC 的計數, 但因LC- 瓊脂培養基能抑制LA 和BB的生長(cháng), 從而適宜于L C 的選擇計數, 因此當產(chǎn)品中只有L A和LC 存在時(shí), 可用LC- 瓊脂測定LC 的菌落數, 再用MRS- 柳醇瓊脂或MRS- 山梨醇瓊脂或MRS- 核糖瓊脂或MRS- 葡萄糖酸鹽瓊脂測其總數,兩者之差即為L(cháng) A 的數量。
2. 3 對幾種含LA 和BB 的市售乳品的檢測結果
通過(guò)使用上述培養基進(jìn)行菌類(lèi)培養成熟后，在對市面上出售的乳制品進(jìn)行抽樣檢測， 從檢測結果分析來(lái)看： 所選的培養基和培養條件適合對S T 、L B、L A 和B B的選擇計數,對照樣品的檢測結果接近實(shí)際菌數, 同時(shí)還發(fā)現除了對照樣品和加LA 與BB的酸乳中LA 和BB 的數量較高外, 其它市售酸乳中含的LA 和BB 菌數均較低。
2. 4 對幾種市售產(chǎn)品中LC 的選擇計數檢測結果
以L(fǎng) C- 瓊脂培養基分別檢測9 種市售乳品中干酪乳桿菌的數量, 其結果如表5 所示, 可見(jiàn)在其它乳酸菌存在下LC- 瓊脂適合對干酪乳桿菌的選擇計數。在所測的9 種產(chǎn)品中, 只有3 種干酪乳桿菌活菌數在106cfu/g( mL) 以上, 其余數量均較低, 而對照樣品中的干酪乳桿菌數最高, 與實(shí)際數接近。

3. 結束語(yǔ)

本文通過(guò)設計研究方案，對含活性乳酸菌乳制品中不同活性菌的計算方法進(jìn)行嘗試，并取得了不錯的試驗效果。本文發(fā)現：用R I-瓊脂培養基來(lái)分離熱乳鏈球菌能夠收到顯著(zhù)效果; 可用K L-乳酸菌培養基來(lái)分離干酪乳桿菌;用NG V-MMWN氨基培養基分離雙歧桿菌; N L H-p C7.1碳酸培養基分離和提取保加利亞乳桿菌; NUL-氧脂酸 分離和提取嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌; 如果只需要提取和分離嗜酸乳桿菌和干酪乳桿菌, 則可在計算其總數量之后，在用N L-碳酸基培養基分離干酪乳桿菌數, 剩余即為嗜酸乳桿菌數量。希望本文的研究能過(guò)為有關(guān)食品質(zhì)量監督部門(mén)和生產(chǎn)企業(yè)提供一種科學(xué)可靠的活性菌檢測工具，以提高市場(chǎng)上乳制產(chǎn)品的質(zhì)量。

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