一、實(shí)驗目的和內容
目的:鞏固油鏡的使用;掌握細菌形態(tài)觀(guān)察的基本方法,了解細菌的基本形態(tài)。
內容:1.觀(guān)察細菌的基本形態(tài)染色裝片。
2.觀(guān)察枯草芽孢桿菌活菌。
3.觀(guān)察細菌細胞結構的染色裝片。
二、實(shí)驗材料和用具
溶血鏈球菌(Streptococcus haemolyticus )、棒桿菌(Corymebacterium)、螺菌(Spirillum)、浮游球衣菌(Sphaerotilus natans)、巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium )、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis )、普通變形菌(Proteus vulgaris)、丙酮丁醇梭菌(Clostridum acetotylicum)、褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum )等細菌的染色裝片,枯草芽泡桿菌(Bacillus subis)的斜面菌種。
香柏油、二甲苯、無(wú)菌水;
顯微鏡、擦鏡紙、接種環(huán)、酒精燈、載玻片、蓋玻片、吸水紙、小滴管。
三、操作步驟
(一)觀(guān)察細菌的基本形態(tài)
用低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀(guān)察溶血鏈球菌、棒桿菌、螺菌、浮游球衣菌的染色裝片,并分別在油鏡下繪圖。
(二)觀(guān)察細菌的細胞結構
用低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀(guān)察巨大芽孢桿菌(示細胞壁)、巨大芽孢桿菌(示異染粒)、蘇云金芽孢桿菌(示伴胞晶體)、普通變形菌(示鞭毛)、丙酮丁醇梭菌(示芽孢)、褐球固氮菌(示莢膜)等細菌的染色裝片,并分別在油鏡下繪圖。
(三)觀(guān)察枯草桿菌活菌,常用壓滴法觀(guān)察。
1.將潔凈無(wú)油膩的載片放于自己右邊前方,在中央放一小滴無(wú)菌水。
2.將酒精燈放于自己正前方,點(diǎn)燃。
3.用無(wú)菌操作方法從枯草芽孢桿菌斜面中沾取少量菌體,與載片上的水滴充分混勻,把接種環(huán)上殘留的菌體殺滅后,放回試管架。
4.用鑷子夾一潔凈的蓋玻片,使其一邊先接觸菌液,然后將整個(gè)蓋玻片慢慢放下,注意不要產(chǎn)生氣泡。如菌液過(guò)多,可用吸水紙適當吸去一部分。
5.先用低倍鏡然后轉用高倍鏡觀(guān)察,觀(guān)察時(shí)光線(xiàn)要適當調暗些。
四、注意事項
1.注意擦鏡頭時(shí),只能用擦鏡紙。
2,觀(guān)察完畢,必須將鏡筒上升,才能取下裝片,放入另一裝片后,要按使用油鏡要求,重新操作,不能在油鏡下直接取下和替換裝片,切記!
3.無(wú)菌操作過(guò)程中,接種環(huán)滅菌后不能觸及其他物品,挑菌不能過(guò)多。
五、實(shí)驗報告
(一)繪圖
l.給出你所觀(guān)察到的幾種細菌的個(gè)體形態(tài)視野圖。
2.給出你所觀(guān)察到的細菌細胞結構視野圖,并注明各部分。
(二)試指出在制備活菌裝片時(shí),應注意什么問(wèn)題?
七、問(wèn)題和思考
1.用明視野顯微鏡觀(guān)察細菌的形態(tài)時(shí),你認為用染色裝片好,還是用非染色的活體裝片好,為什么?觀(guān)察活體裝片與染色裝片,光線(xiàn)調節各有什么不同?
2.無(wú)菌操作過(guò)程中,可否將棉塞放在桌面上?為什么?
3試設計一個(gè)準備本實(shí)驗的工作方案。
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