顯微鏡油浸系物鏡的使用

                  顯微鏡油浸系物鏡的使用
 
一、實(shí)驗目的和內容
目的：復習顯微鏡低倍鏡和高倍鏡的使用技術(shù)，了解油浸系物鏡的基本原理，掌握油浸系物鏡的使用方法。
內容：1．學(xué)習油浸系物鏡的使用方法。
      2．用油鏡觀(guān)察枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌染色裝片。
二、實(shí)驗材料和用具
枯草芽孢桿菌(Bacillus subitilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的染色裝片。
香柏油、二甲苯、顯微鏡、擦鏡紙。
三、操作步驟
(一)觀(guān)察前的準備
1．將顯微鏡置于平穩的實(shí)驗臺上，鏡座距實(shí)驗臺邊沿約為4cm。坐正，練習用左眼觀(guān)察。
2．調節光源：將低倍物鏡轉到工作位置，把光圈完全打開(kāi)，聚光器升至與載物臺相距約1mm左右。轉動(dòng)反光鏡采集光源，光線(xiàn)較強的天然光源宜用平面鏡，光線(xiàn)較弱的天然光源或人工光源宜用凹面鏡，對光至視野內均勻明亮為止。觀(guān)察染色裝片時(shí)，光線(xiàn)宜強；觀(guān)察末染色裝片時(shí)，光線(xiàn)不宜太強。
(二)低倍鏡觀(guān)察染色裝片
首先上升鏡簡(jiǎn)，將枯草芽孢桿菌染色裝片置于載物臺上，用標本夾夾住，將觀(guān)察位置移至物鏡正下方，物鏡降至距裝片0.5cm處，適當縮小光圈然后兩眼從目鏡觀(guān)察，轉動(dòng)粗調節器使物鏡逐漸上升(或使鏡臺下降)至發(fā)現物像時(shí)，改用細調節器調節到物像清楚為止。移動(dòng)裝片，把合適的觀(guān)察部位移至視野中心。
(三)高倍鏡觀(guān)察
眼睛離開(kāi)目鏡從側面觀(guān)察，旋轉轉換器，將高倍鏡轉至正下方，注意避免鏡頭與玻片相懂。再由目鏡觀(guān)察，仔細調節光圈，使光線(xiàn)的明亮度適宜。用細調節器校正焦距使物鏡清晰為止。將最適宜觀(guān)察部位移至視野中心，繪圖。不要移動(dòng)裝片位置，準備用油鏡觀(guān)察。
(四)油鏡觀(guān)察
1．提起鏡筒約2cm，將油鏡轉至正下方。在玻片標本的鏡檢部位(鏡頭的正下方)滴一滴香柏油。
2．從側面注視，小心慢慢降下鏡筒，使油鏡浸在油中至油圈不擴大為止，鏡頭幾乎與裝片接觸，但不可壓及裝片，以免壓碎玻片，損壞鏡頭。
3．將光線(xiàn)調亮，左眼從目鏡觀(guān)察，用粗調節器將鏡筒徐徐上升(切忌反方向旋轉)，當視野中有物像出現時(shí)，再用細調節器校正焦距。如因鏡頭下降未到位或鏡頭上升太快末找到物像，必須再從側面觀(guān)察，將油鏡降下，重復操作直至物像看清為止。仔細觀(guān)察并繪圖。
4．再次觀(guān)察 提起鏡筒，換上金黃色葡萄球菌染色裝片，依次用低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀(guān)察，繪圖。重復觀(guān)察時(shí)可比第一次少加香柏油。
(五)鏡檢完畢后的工作
1．移開(kāi)物鏡鏡頭。
2．取出裝片。
3．清潔油鏡，油鏡使用完畢后，須用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油，再用擦鏡紙沾少許二甲苯擦掉殘留的香柏油，最后再用干凈的擦鏡紙擦干殘留的二甲苯。
4．擦凈顯微鏡，將各部分還原。將接物鏡呈“八”字形降下，不可使其正對聚光器，同時(shí)降下聚光器，轉動(dòng)反光鏡使其鏡面垂直于鏡座。最后套上鏡罩，對號放入鏡箱中，置陰涼干燥處存放。
四、注意事項
1．使用油鏡必須按先用低倍鏡和高倍鏡觀(guān)察，再用油鏡觀(guān)察
2．下降鏡頭時(shí)，一定要從側面注視，切忌用眼睛對著(zhù)目鏡，邊觀(guān)察邊下降鏡頭的錯誤操作，以免壓碎玻片而損壞鏡頭。
3．使用二甲苯擦鏡頭時(shí)，注意二甲苯不能過(guò)多，以防溶解固定透鏡的樹(shù)脂。
4．注意保持顯微鏡的潔凈，對金屬部分要用軟布擦拭，擦鏡頭必須用擦鏡紙，切勿用手或用普通布、紙等，以免損壞鏡頭。
五、實(shí)驗報告
分別繪出在高倍鏡和油鏡下觀(guān)察到的枯草芽孢桿菌及金黃色葡萄球菌的形態(tài)，注明物鏡放大倍數和總放大率。
六、問(wèn)題和思考
1．用油鏡便于觀(guān)察細菌的依據是什么？
2．使用油鏡應特別注意哪些問(wèn)題？
3．當物鏡從低倍鏡轉到高倍鏡和油鏡時(shí)，對照明度有何要求？應如何調節？
油鏡的基本原理
（一）油鏡頭的辨認
油鏡頭上�？逃蠴I(oil immersion)或HI（homogeneneous immersion）字樣，有的還刻有一圈紅線(xiàn)或黑線(xiàn)標記，在低倍物鏡、高倍物鏡和油鏡3物鏡中，油鏡的放大倍數和數值孔徑（numerical aperture）最大，而工作距離最短（圖5—1）
 （二）顯微鏡的分辨率
顯微鏡性能的優(yōu)劣不單是看它的總放大倍數，更重要的是看它分辯率的大小。分辨率是指顯微鏡能分辨出物體兩點(diǎn)間最小距離（D）的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值與光線(xiàn)的波長(cháng)（λ）成正比，與物鏡的數值孔徑（NA）成反比。
從上式可看出，縮短光波長(cháng)和增大數值孔徑都可提高分辨率。
數值孔徑指光線(xiàn)投射到物鏡上的最大角度（稱(chēng)鏡口角，α）的一半正弦與介質(zhì)折射率（n）的乘積； 
影響數值孔徑大小的因數，一是鏡口角，二是介質(zhì)的折射率。
當鏡與裝片之間的介質(zhì)為空氣時(shí)，由于空氣（n= 1.52）的折射率不同，光線(xiàn)會(huì )發(fā)生折射，不僅使進(jìn)入物鏡的光線(xiàn)減少，降低了視野的照明度，而且會(huì )減少鏡口角（圖5—2A）。當以香柏油（n=1.515）為介質(zhì)時(shí)，由于它的折射率與玻璃相近，光線(xiàn)經(jīng)過(guò)載玻片后可直接通過(guò)香柏油進(jìn)入物鏡而不發(fā)生折射（圖5—2B），不僅增加了視野的照明度，更重要的是通過(guò)增加數值孔徑達到提高分辨率的目的�？梢�(jiàn)光的波長(cháng)平均為0.55μm。當使用數值孔徑為0.65的高倍鏡時(shí)，它能辨別兩點(diǎn)之間的距離為0.42μm；而使用數值孔徑為1.25的油鏡時(shí)，能辨別兩點(diǎn)之間的距離則為0.22μm。
   

 

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