細菌回復突變試驗儀器和試劑（一）-GB 15193．4—2014

4、儀器和試劑
4．1  儀器
    實(shí)驗室常用設備、低溫高速離心機、低溫冰箱(-80℃)或液氮罐、生物安全柜、恒溫培養箱、恒溫水
浴、滅菌設備、勻漿器等。
4．2試劑

4.2.1  營(yíng)養肉湯培養基
       牛肉膏        2.5 g
       胰蛋白胨      5.0 g
       氯化鈉        2.5 g
       磷酸氫二鉀    1．3 g
    加蒸餾水至500 mL，加熱溶解，調pH至7.4，分裝后0.103 MPa滅菌20 min，4℃保存備用，保存
期不超過(guò)半年。

4.2.2 營(yíng)養肉湯瓊脂培養基
    瓊脂粉    1.5 g
    加營(yíng)養肉湯培養基至100 mL，加熱融化后調節pH為7.4，0.103 MPa滅菌20 min。

4.2.3 底層培養基
4.2.3.1  配制方法
    在400mL滅菌的1.5％瓊脂培養基(100℃)中依次加入磷酸鹽貯備液8 mL，40％葡萄糖溶液
20mL，充分混勻，冷卻至80℃左右時(shí)按每平皿25 mL(相對于90 mm平皿)制備平板，冷凝固化后倒
置于37℃培養箱中24 h，備用。

4.2.3.2  磷酸鹽貯備液(Vogel—Bonner minimal medium E，50倍)
    磷酸氫鈉銨       17．5 g
    檸檬酸           10．0 g
    磷酸氫二鉀       50．0 g
    硫酸鎂           1．O g
    加蒸餾水至100 mL溶解，0.103 MPa滅菌20 min。
    注：待其他試劑完全溶解后冉將硫酸鎂緩慢放人其中繼續溶解，否則容易析出沉淀。
4.2.3.2  40％葡萄糖溶液
    葡萄糖40．0 g加蒸餾水至100 mI．，O．055 MPa滅菌20 min。
4.2.3.4  1.5％瓊脂培養基
    瓊脂粉6.0加入400 mL錐形瓶，加蒸餾水至400 mL，融化后，0.103 MPa滅菌20 min。
4.2.4 頂層培養基
    加熱融化頂層瓊脂，每100 mL頂層瓊脂中加10 mL組氨酸生物素溶液(0.5 mmol／L)�；靹�，分
裝在4個(gè)燒瓶中，0.103 MPa滅菌20 min。用時(shí)融化分裝小試管，每管2 mL，45℃水浴中保溫。頂層
瓊脂和組氨酸生物素溶液(0.5mmol／L)配制如下。
4.2.4.1 頂層瓊脂
    瓊脂粉3.0 g，氯化鈉2.5g加蒸餾水至500 mI。，0.103 MPa滅菌20 min。

4.2.4.2 組氨酸一生物素溶液(0.5mmol／L)(誘變試驗用)
    D-生物素(相對分子質(zhì)量244)30．5 mg和L-組氨酸(相對分子質(zhì)量155)19．4 mg加蒸餾水至
250 mL，0.103 MPa滅菌20 min。
4.2.5特殊試劑及培養基
4.2.5.1 0.8％氨芐青霉素溶液(鑒定菌株用，無(wú)菌配制)
    氨芐青霉素40 mg用氫氧化鈉溶液(0.02 mo1／L)稀釋至5 mL，保存4℃冰箱備用。
4.2.5.2 0.1％結晶紫溶液(鑒定菌株用)
    100 mg結晶紫，溶于無(wú)菌水至100 mL。
4.2.5.3 L-組氨酸溶液和D-生物素溶液(0.5mmol／L)(鑒定菌株用)
    L-組氨酸0.4043 g和D-生物素12．2 mg分別溶于蒸餾水至100 mL，0.103 MPa滅菌20 min，保存
于4℃冰箱備用。
4.2.5.4 0.8％四環(huán)素溶液(用于四環(huán)素抗性試驗和氨芐青霉素四環(huán)素平板)
    40 mg四環(huán)素用鹽酸緩沖液(0.02 mol／L)稀釋至5 mL，保存于4℃冰箱。
4.2.5.5 氨芐青霉素平板(用作TA97、TA98、TAl00菌株的主平板)和氨芐青霉素四環(huán)素平板(用作
TAl02菌株的主平板)
    每1000 mL由以下成分組成：
    底層培養基    980 mL
    組氨酸水溶液(0.4043 g／100 mL)    10 mL
    生物素(0.5mmol／L)    6 mL
    0.8％氨芐青霉素溶液    3.15 mL
    0.8％四環(huán)素溶液    0.25 mL
    四環(huán)素僅在使用對四環(huán)素有抗性的TAl02時(shí)加入。各成分均已分別滅菌或無(wú)菌制備。
4.2.5.6組氨酸-生物素平板(組氨酸需要試驗用)
    每1000 mL中由以下成分組成：
    底層培養基    984 mL
    組氨酸水溶液(0.4043 g／100 mL)  10 mL
    生物素(0.5 mmol／L)  6 mL
    各成分均已分別滅菌。
4.2.5.7二甲亞砜(DMSO)
    光譜純，無(wú)菌。

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