肉毒毒素方法介紹

小鼠生物檢測：是目前唯一被公認的確認肉毒毒素的方法，是檢測肉毒毒素的金標準。

基于免疫化學(xué)的檢測方法（A、B、E、F型肉素的檢測）：

 ELISA法：用來(lái)檢測肉毒毒素已經(jīng)有20多年了，但是常規ELISA的檢測靈敏度遠遠低于小鼠生物檢測。目前試用的有amp-ELISA、DIG- ELISA，提高了靈敏度，此方法已被用于檢測食物樣品，檢測時(shí)間大約需要6h。但是存在型間交叉的問(wèn)題，陽(yáng)性樣品仍需小鼠生物檢測法進(jìn)行確認。

 PCR法：目前還沒(méi)有用此方法檢測樣品，原因是其靈敏度非常高，容易受樣品基質(zhì)的干擾得至假陽(yáng)性結果。檢測純水中的毒素只需3h。

 目前已發(fā)表或試用的其它方法：免疫電泳法、放射免疫法、瓊脂凝膠擴散法等。但這些方法的敏感性都不如小鼠生物檢測法高

檢出試驗：

           取上述離心上清液及其胰酶激活處理液分別注射小白鼠3只，每只0.5mL，觀(guān)察4d。注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠一般多在注射后24h內發(fā)病、死亡。主要癥狀為豎毛，四肢癱軟，呼吸困難，呼吸呈風(fēng)箱式，腰部凹陷，宛若蜂腰，最終死于呼吸麻痹。如遇小鼠猝死以至癥狀不明顯時(shí)，則可將注射液做適當稀釋?zhuān)�重做試驗�?

確證試驗：

         不論上清液或其胰酶激活處理液，凡能致小鼠發(fā)病、死亡者，取樣分成3份進(jìn)行試驗，1份加等量多型混合肉毒抗毒診斷血清，混勻，37℃作用30min，1份加等量明膠磷酸鹽緩沖液，混勻，煮沸10min；1份加等量明膠磷酸鹽緩沖液，混勻即可，不做其他處理。3份混合液分別注射小白鼠各2只，每只0.5mL，觀(guān)察4d，若注射加診斷血清與煮沸加熱的2份混合液的小白鼠均獲保護存活，而唯有注射未經(jīng)其他處理的混合液的小白鼠以特有癥狀死亡，則可判定檢樣中有肉毒毒素存在，必要時(shí)要進(jìn)行毒力測定及定型試驗。

毒力測定：

          取已判定含有肉毒毒素的檢樣離心上清液，用明膠磷酸鹽緩沖液做成50倍、500倍及5000倍的稀釋液，分別注射小白鼠各2只，每只0.5mL，觀(guān)察4d。根據動(dòng)物死亡情況，計算檢樣所含肉毒毒素的大體毒力(MLD/mL或MLD/g)。例如：5倍、50倍及500倍稀釋致動(dòng)物全部死亡，而注射5000倍稀釋液的動(dòng)物全部存活，則可大體判定檢樣上清液所含毒素的毒力為1000～10000MLD/mL。

定型試驗：

          按毒力測定結果，用明膠磷酸鹽緩沖液將檢樣上清液稀釋至所含毒素的毒力大體在10～1000MLD/mL的范圍，分別與各單型肉毒抗診斷血清等量混勻，37℃作用30min，各注射小鼠2只，每只0.5mL，觀(guān)察4d。同時(shí)以明膠磷酸鹽緩沖液代替診斷血清，與稀釋毒素液等量混合作為對照。能保護動(dòng)物免于發(fā)病、死亡的診斷血清型即為檢樣所含肉毒毒素的型別。

注：

1.未經(jīng)胰酶激活處理的檢樣的毒素檢出試驗或確證試驗若為陽(yáng)性結果，則胰酶激活處理液可省略毒力測定及定型試驗。

2.為爭取時(shí)間盡快得出結果，毒素檢測的各項試驗也可同時(shí)進(jìn)行。

3.根據具體條件和可能性，定型試驗可酌情先省略C、D、F及G型。

4.進(jìn)行確證及定型等中和試驗時(shí)，檢樣的稀釋?xiě)獏⒄账�用肉毒診斷血清的效價(jià)。

5.試驗動(dòng)物的觀(guān)察可按陽(yáng)性結果的出現隨時(shí)結束，以縮短觀(guān)察時(shí)間；唯有出現陰性結果時(shí)，應保留充分的觀(guān)察時(shí)間。

上一篇：肉毒中毒分型

下一篇：鮮乳抗生素檢驗的原理與程序