微孔濾膜過(guò)濾除菌

                      微孔濾膜過(guò)濾除菌
（一）目的要求
1．了解過(guò)濾除菌的原理。
2．掌握微孔濾膜過(guò)濾除菌的方法。
（二）基本原理
過(guò)濾除菌是通過(guò)機械作用濾去液體或氣體中細菌的方法。根據不同的需要選用不同的濾器和濾板材料。微孔濾膜過(guò)濾器是由上下二個(gè)分別具有出口和入口連接裝置的塑料蓋盒組成，出口處可連接針頭，人口處可連接針筒，使用時(shí)將濾膜裝入兩塑料蓋盒之間，旋緊蓋盒，當溶液從針筒注入濾器時(shí)，此濾器將各種微生物阻留在微孔濾膜上面，從而達到除菌的目的。根據待除菌溶液量的多少，可選用不同大小的濾器。此法除菌的最大優(yōu)點(diǎn)是可以不破壞溶液中各種物質(zhì)的化學(xué)成分，但由于濾量有限，所以一般只適用于實(shí)驗室中小量溶液的過(guò)濾除菌。
（三）器材
1．培養基  2%的葡萄糖溶液，肉湯蛋白胨平板。
2．儀器或其他用具  注射器，微孔濾膜過(guò)濾器，0.22μm濾膜，無(wú)菌試管，鑷子，玻璃刮棒。
（四）操作步驟
l．組裝、滅菌
將0.22μm孔徑的濾膜裝入清洗干凈的塑料濾器中，旋緊壓平，包裝滅菌后待用(0.lMPa，121.5℃滅菌20min)。
2．連接
將滅菌濾器的入口在無(wú)菌條件下，以無(wú)菌操作方式連接于裝有待濾溶液（2%葡萄糖溶液）的注射器上，將針頭與出口處連接并插入帶橡皮塞的無(wú)菌試管中。見(jiàn)圖2—3。
3．壓濾
將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過(guò)濾到無(wú)菌試管中，濾畢，將針頭撥出。  
壓濾時(shí)，用力要適當，不可太猛太快，以免細菌被擠壓通過(guò)淀膠．
4．無(wú)菌檢查
無(wú)菌操作吸取除菌濾液0.1ml于肉湯蛋白胨平板上，涂布均勻，置37℃溫室中培養24h，檢查是否有菌生長(cháng)。
5．清洗
棄去塑料濾器上的微孔濾膜，將塑料濾器清洗干凈，并換上一張新的微孔濾膜，組裝包扎，再經(jīng)無(wú)菌后使用。
整個(gè)過(guò)程應在無(wú)菌條件下嚴格無(wú)菌操作，以防污染，過(guò)濾時(shí)應避免各連接處出現滲漏現象。
（五）實(shí)驗報告
 l．結果
記錄無(wú)菌檢查結果
2．思考題
(1)你做的過(guò)濾除菌實(shí)驗效果如何?如果經(jīng)培養檢查有雜菌生長(cháng)，你認為是什么原因造成的?
(2)如果你需要配制一種含有某抗生素的牛肉膏蛋白胨培養基，其抗生素的終濃度(或工作濃度)為50μg/ml，你將如何操作?
(3)過(guò)濾除菌應注意哪些問(wèn)題? 
  
   

 

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