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間接法測抗體
間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）以檢測與固相抗原結合的受檢抗體，故稱(chēng)為間接法 。
競爭法測抗體
當抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽(yáng)性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會(huì )有干擾物質(zhì)，直接包被不易成功，可采用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然后加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質(zhì)，然后再加標本和酶標抗體進(jìn)行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進(jìn)行競爭結合，洗滌后再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。
標本的采取和保存
可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫學(xué)檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時(shí)會(huì )釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會(huì )增加非特異性顯色。
血清標本宜在新鮮時(shí)檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP（辣根過(guò)氧化物酶），也會(huì )產(chǎn)生假陽(yáng)性反應。如在冰箱中保存過(guò)久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說(shuō)來(lái)，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，超過(guò)一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強烈振蕩�；鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過(guò)濾，澄清后再檢測。反復凍融會(huì )使抗體效價(jià)跌落，所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應注意無(wú)菌操作，也可加入適當防腐劑。
