國家標準β型溶血性鏈球菌檢驗流程（GB4789.11-2014）

操作步驟

6.1 樣品處理及增菌

按無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣 按無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣 按無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣 按無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣 按無(wú)菌操作稱(chēng)取檢樣 25 g （mL ）加 入盛有225 mLTSB的均質(zhì)袋中，用拍擊式器1 min～ 2 min ；或加入盛有  225 mL  TSB 的均質(zhì)杯中，以 8000 r/min～10000 r/min 均質(zhì)1 min～2 min。若樣品為 液態(tài)，振蕩均勻即可。  36 ℃ ±1 ℃培養 18 h ～24 h 。

6.2 分離

將增菌液劃線(xiàn)接種于哥倫比亞CNACNACNA血瓊脂平板， 血瓊脂平板，36 ℃±1 ℃厭氧培養18 h ～24 h ，觀(guān)察菌落形態(tài)。

溶血性鏈球菌在哥倫比亞 CNACNACNA血瓊脂平板上的 典型菌落 形態(tài)為 直徑 約 2 mm ～3 mm ，灰白色、半透

明光滑表面突起圓形邊緣整齊，并產(chǎn)生 β 型溶血。

6.3 鑒定

6.3.1 分純培養

挑取 5個(gè)（ 如小于 5個(gè)則全選） 可疑菌落分別接種哥倫比亞血瓊脂平板和 TSB 增菌液， 36 ℃ ±1 ℃ 培養 18 h ～24 h 。

6.3.2 革蘭氏染色鏡檢

挑取可疑菌落染色鏡檢。 β 型溶血性鏈球菌球形或卵圓為革蘭氏染色陽(yáng)性， 球形或卵圓常排列成短鏈狀

6.3.3 觸酶試驗

挑取可疑菌落于潔凈的載玻片上，滴加適量 滴加適量 3% 過(guò)氧化氫溶液，立即產(chǎn)生氣泡者為陽(yáng)性。β 型溶血性 型溶血性 鏈球菌觸酶為陰性。 6.3.4 鏈激酶試驗（選做項目）

吸取草酸鉀血漿0.2 mL于 0.8 mL滅菌生理鹽水中混勻，再加入經(jīng) 36 ℃±1 ℃培養 18 h ～24 h 的可 疑菌的TSB培養液0.5 mL及 0.25% 氯化鈣溶液0.25 mL，振蕩搖勻置于36 ℃±1 ℃水浴中10 min，血 漿混合物自行凝固（程度至試管倒置，內容不流動(dòng)）。繼續 36 ℃±1 ℃培養24 h ，重新完全溶解為陽(yáng)性 ，不陰

6.3.5 其他檢驗

使用生化鑒定試劑盒或卡對可疑菌落進(jìn)行。

7 結果與報告

綜合以上試驗結果，報告每 25 g （mL ）檢樣中出或未溶血性鏈球

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