O157檢驗增菌與分離

增菌

         以無(wú)菌操作取檢樣25g(mL)加入到含有225mL mEC+n肉湯的均質(zhì)袋中，在拍擊式均質(zhì)器上連續均質(zhì)1～2　min。于36±1℃培養18～24h。同時(shí)做陽(yáng)性及陰性對照。

      無(wú)菌操作，陰陽(yáng)行對照避免交叉污染。

      1000mL增菌培養基中加1mL新生霉素儲備液，使最終濃度為20mg/L。

分離

      取增菌后或篩選試驗陽(yáng)性的mEC+n肉湯，分別劃線(xiàn)或適當稀釋后取0.1mL涂布接種于CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板上，于36±1℃培養18～24h，觀(guān)察菌落。必要時(shí)將混合菌落分純。在CT-SMAC平板上，發(fā)酵山梨醇的菌落為紅色；典型菌落為不發(fā)酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無(wú)色菌落，中心呈現較暗的灰褐色，用接種針挑起時(shí)無(wú)拉絲現象。在改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板上為圓形、較小的菌落，中心呈淡紫色-紫紅色，邊緣無(wú)色或淺灰色。

取1000ml滅菌融化并冷卻至45℃±1℃的山梨醇麥康凱(SMAC)瓊脂, 加入1 ml亞碲酸鉀溶液和10mL頭孢克肟溶液，混勻后傾注平板。

亞碲酸鉀最終濃度達到2.5mg/L，頭孢克肟最終濃度達到0.05mg/L。

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