O157檢驗方法的條件優(yōu)化

1.增菌培養基：國際上采用的為mEC+n、mTSB+n、 EHEC Enrichment Broth (EEB＝TSB)+CCV、BPW-VCC。通過(guò)比較，mEC與mTSB差異不大，且為我國“污染物監測網(wǎng)”和“全國腸出血性大腸桿菌O157:H7感染性腹瀉”檢測中普遍使用。(2005年,國家食源性疾病監測網(wǎng)  食品中病原菌檢驗)

2.增菌培養溫度：國際方法中有3個(gè)培養溫度：NMKL為41.5±0.5℃  、 USDA/BAM為35±2℃，其余為37℃。實(shí)驗結果表明，在41.5±0.5℃時(shí)，溫度作為一個(gè)選擇性因子，能夠抑制雜菌叢的生長(cháng)，但同時(shí)O157也部分地受到抑制。在36±1℃ 時(shí)，O157的相對量較多。

3.分離培養基：目前國際上采用的培養基有：SMAC、CT-SMAC、Rainbow agar等，本實(shí)驗分別使用了SMAC、CT-SMAC、CHROMagar、改良CHROMagar瓊脂平板，結果表明：改良CHROMagar > CHROMagar > CT-SMAC > SMAC。

4.平板分離方法的選用：

  （1）常規方法：FDA、CCFRA方法均使用2塊平板，涂布：取0.1ml或適當稀釋后的增菌液0.1ml進(jìn)行，劃線(xiàn)取滿(mǎn)環(huán)。通過(guò)實(shí)驗表明，選擇2塊平板， CT-SMAC和改良CHROMagar ，取增菌液0.1ml先涂布一半，再劃線(xiàn)一半，可以減少操作誤差，得到較好的分離效果。

（2）磁珠方法（IMS）：國際上使用磁珠量為20 μl ，選擇2塊平板， CT-SMAC和改良CHROMagar ，取磁珠懸液各50 μl，先涂布一半，再劃線(xiàn)一半，可以減少操作誤差，同樣得到較好的分離效果。

5. 血清學(xué)：使用O157、H7因子血清鑒別。但哈夫尼亞、變形、異常沙門(mén)菌、檸檬酸桿菌等與O157可能有交叉反應，需要用生化進(jìn)一步鑒定。

6.生化項目：一般使用Indole、MUG等作為篩選試驗，API20E、VITEK GNI或GNI+作為鑒定試驗。本法使用TSI、MUG作為篩選，MUG可篩除E.coli、宋內氏、檸檬酸桿菌、腸桿菌、克雷伯氏菌、哈夫尼亞菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、耶耳森氏菌等。TSI可篩除沙門(mén)菌、志賀氏菌、變形、部分普羅菲登氏菌、摩根氏菌等。 API20E、VITEK GNI或GNI+作為鑒定試驗。

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